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目的:1.探讨静压力对聚乳酸-乙醇酸聚合物(PLGA)支架上人牙龈成纤维细胞(HGFs)中整合素α5β1、黏着班激酶(FAK)、磷酸化FAK(p-FAK)及Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)表达的影响;2.探讨抑制HGFs中整合素α5β1的表达后,FAK、p-FAK和COL-Ⅰ表达的变化情况,以初步探讨整合素α5β1在HGFs的机械力学信号传导和纤维化过程中的作用机制。方法:1、采用组织块培养法进行HGFs的原代培养;取第4-6代的HGFs接种于PLGA支架上,构建HGFs的三维培养模型。2、采用重物加载模型,对PLGA-HGFs复合体施加25g/cm2的静压力,作用时间分别为0、3、6、12、24、48小时。采用RT-qPCR和Western blot技术检测三维培养的HGFs整合素α5β1、FAK、p-FAK和COL-Ⅰ的mRNA与蛋白表达变化情况。3、利用整合素α5β1抑制剂(ATN-161)构建HGFs的整合素α5β1抑制模型。采用CCK-8技术检测不同浓度(0、10nM、100nM、1μM、10μM、100μM、1mM)的ATN-161对细胞增殖活性的影响,作用时间分别是0、24、48、72小时;采用RT-qPCR技术检测不同浓度(0、10nM、100nM、1μM、10μM)的ATN-161对HGFs表达整合素α5β1 mRNA的影响情况,作用时间为48小时。4、对PLGA-HGFs复合体加入浓度为1μM的ATN-161,作用时间分别为0、3、6、12、24、48小时;对PLGA-HGFs复合体加入浓度为1μM的ATN-161后,施加25g/cm2的静压力,作用时间分别为0、3、6、12、24、48小时,采用RT-qPCR和Western blot技术检测三维培养的HGFs整合素α5β1、FAK、p-FAK和COL-Ⅰ的mRNA与蛋白表达变化情况。结果:1、采用组织块培养法成功培养出原代细胞,经传代纯化细胞,性状稳定,取第4-6代HGFs接种于PLGA支架,构建PLGA-HGFs三维培养模型。2、对PLGA支架上HGFs施加25 g/cm2的静压力后,HGFs整合素α5β1、FAK(p-FAK)和COL-Ⅰ的mRNA和蛋白表达量均上调。整合素α5β1、FAK的mRNA和蛋白表达量在3-6h时表达量最高,6h后缓慢下降;磷酸化FAK蛋白表达量在12h时表达量达到峰值,12h后逐渐下降,趋于正常值;COL-Ⅰ的mRNA和蛋白表达量均升高,在24h时表达量最高,24h后缓慢下降。与整合素α5β1、FAK相比,COL-Ⅰ的变化反应较慢。3、在72h内,浓度低于或等于10μM时,ATN-161对HGFs增殖活性无明显影响。浓度高于10μM后,ATN-161对HGFs增殖活性有明显影响,随着时间,抑制作用逐渐增强。浓度为1μM的ATN-161对整合素α5β1的抑制作用最为显著。4、在加入浓度为1μM的ATN-161实验组中,HGFs的整合素α5β1、FAK(p-FAK)、COL-ⅠmRNA和蛋白表达量均有下降。在PLGA-HGFs复合体中加入浓度为1μM的ATN-161后,静压力作用下HGFs的整合素α5β1、FAK、COL-ⅠmRNA表达量在3h时稍有升高,3h后均降低,且低于对照组;整合素α5β1、FAK、COL-Ⅰ的蛋白水平总体上也均有降低;COL-Ⅰ的蛋白表达量在3-6h时有显著的升高,6h后逐渐下降。结论:1、本研究成功构建了PLGA-HGFs三维培养及力学加载模型。2、静压力可以促进HGFs整合素α5β1、FAK(p-FAK)和COL-ⅠmRNA与蛋白的表达,整合素α5β1和FAK参与HGFs力学信号转导。3、静压力作用下,整合素α5β1感应力学信号,调控下游FAK的表达和磷酸化水平,影响细胞合成COL-Ⅰ,从而参与细胞外基质的纤维化过程。