研究背景我国艾滋病监测检测体系逐步完善,在及时发现HIV感染者和艾滋病患者(People Living with HIV/AIDS,PLWHA)等方面发挥了重要作用。但是仍有相当数量的感染者没有被发现,每年发现的感染者中早期感染的也微乎其微,如何最大限度地及时发现PLWHA是当前艾滋病防治工作亟待解决的问题之一。依据我国现行的HIV抗体检测策略,无法有效筛查出HIV-1早期、窗口期感染者,后者对遏制二代传播、预测和发现新的传播模式及防止耐药株的传播极为重要。因此,需要针对我国艾滋病流行背景,在重点人群中开展应用性研究,获取适宜我国的HIV-1早期感染检测策略。目前,我国男男性行为人群(Men who have sex with men,MSM)艾滋病疫情严重,患病率和发病率相对较高,对该人群的防控工作形势严峻。开展对该人群的新发感染率检测,对于了解流行情况,制定有效的防控策略非常重要。依据传统的前瞻性队列研究,可以监测HIV新发感染率,但因耗时长,经费投入大而无法广泛应用。同时还存在失访,选择性偏倚等缺陷。因此,如何利用横断面样品,通过实验室检测的方法,动态估算HIV新发感染率成为十分重要的研究课题。实验室方法具有较大的优势而不会受到上述缺陷的限制。近年来出现的新近感染检测方法众多,最为普遍应用的是BED方法,但该方法对既往感染样本存在一定的误判,因此在使用中受到一些条件的限制。如何研究新的新发感染检测方法成为该领域的重点之一。研究目的一、建立MSM人群HIV-1早期感染检测策略,提高现行检测策略的敏感性,为尽早发现感染者提供科学手段。二、研究新的检测HIV-1新发感染的实验室方法,为科学评估艾滋病流行趋势提供更多可选择的方法。研究样本及方法、研究样本样本由两部分组成。一部分来自2008年4月到2009年10月,黑龙江,辽宁,内蒙古,宁夏和青海省的MSM人群,共11023份血浆；另一部分来自2008年10月至2009年12月,北京佑安医院MSM人群急性感染期队列,共2235份血浆。二、MSM人群HIV-1早期感染检测策略研究使用现行抗体检测策略检测收集到的样本,抗体为阴性的样本进一步采用2种新的策略检测,包括集合核酸方法和第四代ELISA方法。比较现行抗体检测策略和上述两种新策略的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。三、MSM人群HIV-1新发感染率检测方法研究1、血清学方法使用现行抗体检测策略检测收集到的样本,结果判为阳性的样品进行WB检测,分别进行两种血清学方法的研究；(1)对符合要求的HIV阳性样品进行BED检测,计算BED方法估计的新发感染率；(2)分析阳转样本的WB条带,估计p31条带出现的平均阳转时间,并据此估算新发感染率,与BED方法估算的新发感染率进行比较。2、集合核酸方法使用现行检测策略判断为HIV抗体阴性和不确定的样品,进行集合核酸检测,对核酸阳性者进行随访、收集系列阳转样品,研究MSM人群HIV RNA阳性到抗体阳转的平均窗口期,用于估算新发感染率。并与血清学方法估算的新发感染率进行比较。研究结果一、MSM人群早期感染检测1.抗体及核酸检测结果11023份样品经第三代ELISA筛查,307份为初筛阳性,经WB检测282份为阳性,25份为WB不确定,WB阴性为0份。对10716份HIV抗体阴性样品,分别进行集合核酸和第四代ELISA检测,结果：(1)集合核酸检测,发现核酸阳性样品28份；(2)第四代ELISA检测,10616份为阴性,100份为阳性,经WB检测,结果显示：0份阳性,40份不确定,60份阴性。WB不确定的40份样品中,经核酸检测阳性的有15份；WB阴性的60份阴性样品中,核酸检测阳性的为0份。28份窗口期感染样品的病毒载量值范围为3.84～6.84Log10Copies/mL,其中病毒载量万级的样品有7份,占总样品数的25%,其中包括病毒载量值十万级样品有9份,占总样品数32.14%;病毒载量值在百万级以上的样品有10份,占总样品数35.71%。2.早期感染检测策略第三代ELISA检测为阴性的样品中,经核酸检测证实有28例窗口期感染者,漏检28例。经第四代ELISA检测,证实遗漏13例窗口期感染者。HIV急性期感染率为2.54%o(95%CI=1.60‰-3.48‰),现行“第三代ELISA检测+WB”策略与本研究的新策略的敏感性、特异性、阳性预测值等,分别为：(1)“现行策略(第三代ELISA+WB)"的敏感性为90.97%,检测阳性率为2.56%(95%CI=2.26%-2.86%);(2)现行策略检测为阴性的样品,进一步用第四代ELISA检测,其敏感性为95.81%,特异性为100%,阳性预测值为100%,检测阳性率为2.70%(95%CI=2.39%-3.01%)；(3)现行策略检测为阴性的样品,进一步用集合核酸检测检测,其敏感性为100%,特异性为100%,阳性预测值为100%,检测阳性率为2.81%(95%CI=2.50%-3.13%)。二、MSM人群HIV-1新发感染检测1、阳转样本检测结果2235份队列样品中,92份检测为HIV阳性,其中82份抗体阳性,核酸阳性10份。82份抗体阳性样本经BED检测后,估算的新发感染率为5.36%(95%CI=3.95%-6.78%);根据阳性样本WB的条带出现情况,估计的p31条带平均阳转时间为38.9天,p31条带法估计的HIV新发感染率为5.88%(95%CI=2.80%-8.96%)。依据队列发现的窗口期样本,估计的核酸阳性到抗体阳性时间,即窗口期为28.9天。集合核酸检测方法计算的HIV发病率为5.55%(95%CI=2.11%-8.99%)。2、MSM人群新发感染检测结果对黑龙江、辽宁和青海省MSM人群专项调查样本检测,结果：1、BED方法估算的新发感染率分别为：2.36%(95%CI=1.63%-3.08%),2.86%(95%CI=2.17%-3.55%)和4.35%(95%CI=0.09%-8.62%)；2、集合核酸检测方法估算的新发感染率分别为：2.92%(95%CI=1.01%-4.83%),3.97%(95%CI=1.82%-6.13%)和4.73%(95%CI=0.00%-10.08%)。使用本研究的窗口期(μ=29.1天)得到的集合核酸检测法估计的新发感染率分别为2.81%(95%CI=0.97%-4.65%),3.82%(95%CI=1.75%-5.91%)和4.55%(95%CI=0%-9.70%)。BED方法和集合核酸检测方法估算的新发感染率的95%可信区间交叉,差别没有统计学意义。采用窗口期为29.1天计算得到的集合核酸检测法估计的新发感染率低于窗口期为28天的新发感染率,差异有统计学意义(p=0.0186)。研究结论一、MSM人群HIV早期感染检测策略1、针对MSM人群,现行抗体检测策略检测为阴性的样本,进一步使用第四代ELISA检测和核酸检测,可以有效检出窗口期感染,减少漏检,可以作为该人群HIV早期感染的检测策略。2、现有抗体检测+集合核酸检测的策略优于第四代ELISA检测。3、在没有核酸检测条件的情况下,可使用第四代ELISA结合WB检测的策略。二、MSM人群HIV新发感染检测1、WB-p31条带方法的初步研究结果显示,该方法有可能用于新发感染检测,具体应用尚需扩大样本,进一步研究。2、初步研究显示,集合核酸检测方法估算新发感染率与BED-CEIA新近感染检测的结果没有明显差异,应注意集合核酸检测新发感染率时,计算HIV-1新发感染率的影响因素包括目标人群的平均窗口期和样品集合规模。实际应用尚需扩大样本量,以做进一步研究。