一株蛹拟青霉代谢组学及活性物质研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sea0972
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本研究利用高效液相色谱-质谱联用技术并结合代谢组学相关研究方法,对采自安徽省黄山,分离于鳞翅目幼虫的一株蛹拟青霉RCEF4733进行了研究。研究内容包括:不同培养时间菌株次生代谢产物比较分析;不同浓度氧化剂胁迫菌株次生代谢产物比较分析;不同时间紫外线照射菌株次生代谢产物比较分析;常光及暗光条件下继代培养菌株次生代谢产物比较分析。通过不同培养时间菌株次生代谢产物研究结果表明,在常规SDAY培养基的培养下,菌株RCEF4733代谢产物随着培养时间的不同产生很大的变化。菌株代谢产物的变化根据培养时间的不同可以分为明显的前后两部分,前期为从培养开始至第5天,蛹拟青霉主要产生脂类物质的水解和氧化产物,这些物质对于虫生真菌从开始侵染宿主到宿主体内定殖具有重要作用,因此在人工培养虫草或进行生物防治时,可以选择该时期的菌种来提高侵染率;培养后期为第6天至第9天,主要产生一些糖类物质氧化产物及相关衍生物,由此可以推测该时期蛹拟青霉菌丝体内有关糖类物质代谢的酶较为活跃,可快速消耗寄主昆虫体内糖原,削弱其代谢和防御。上述代谢产物变化可以推测出蛹拟青霉生长过程中优先利用脂类物质,糖类物质次之,此与真菌感染昆虫的实际需要一致。对不同浓度氧化剂胁迫下供试菌种次生代谢物分析表明:氧化剂浓度相同时,菌株RCEF4733产生的次生代谢产物组内差异不明显;随着氧化剂浓度的升高,次生代谢产物组间差异明显;当氧化剂浓度达到0.05mL/100mL时,各组样品分布趋势出现转折,将样品明显的分为左右两部分(质谱阴离子模式下该特征更为明显),表明该氧化剂浓度对菌株次生物质的代谢具有重要的影响。质谱阴阳两种离子模式下检测到的物质种类主要有核苷类、酮类、酯类和氨基酸及其类似物、甘油酯类、不饱和脂肪酸、糖类、甘露醇等,未鉴定出的物质根据其出峰时间、不饱和度及化合物数据库初步查询可能为小肽类物质,研究同时发现硬脂酸的相对含量随着氧化剂浓度的升高逐渐下降,而不饱和脂肪酸油酸和棕榈酸的相对含量变化趋势则随着氧化剂浓度的升高逐渐上升,不饱和脂肪酸是以饱和脂肪酸为底物或前体物质在相关酶的作用下合成,由此可以初步推测:在一定浓度的氧化剂存在条件下有利于饱和脂肪酸的脱饱和,一方面保护菌株本身其他物质不被破坏,同时也为菌株进行其他的生命活动提供能量。对不同时间紫外线照射菌株RCEF4733次生代谢产物分析表明:菌株产生的差异代谢物主要有脂类、氨基酸类、饱和脂肪酸类、甾醇类、糖类等物质,短时间的紫外线照射(10秒及20秒)对菌株本身代谢产物的形成影响不明显。而较长时间的照射对供试菌株影响明显,紫外照射时间越长,供试菌株体内某些化合物(未鉴定)浓度越高。菌株产生的差异代谢产物分析发现谷氨酸与另一种目前尚未鉴定的物质具有抗紫外的能力。通过对菌株RCEF4733进行继代培养的研究发现:在继代培养前3代内菌株代谢产物差异不明显,从第4代开始代谢产物开始出现变化,随着继代次数的增加代谢产物组间差异有增大的趋势;继代培养形成的差异次生代谢物中除去一种完全未鉴定出的物质外,主要有不饱和脂肪酸类、磷脂类、酯类、甾醇类等物质。对继代过程中给予不同光照条件的菌丝分析结果发现:黑暗条件下菌株产生代谢产物的差异要较正常光照明显,表明继代培养过程中改变菌株正常光照条件有加快菌株代谢变异的趋势。
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