目的从体外和体内实验探讨D-半乳糖（D-galactose,D-Gal）诱导视网膜衰老进程中β淀粉样蛋白（Aβ蛋白）的产生及相关损伤作用的研究。方法1、动物实验将30只6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分成3组,每组10只:对照组（皮下注射生理盐水）、实验组（皮下注射125mg/kg·d、350mg/kg·d浓度的D-Gal）。实验组在连续给药12周后,视网膜电图（Electroretinogram,ERG）检测视网膜功能变化、光学相干断层扫描（Optical Coherence Tomography,OCT）检测视网膜结构变化、免疫荧光染色检测视网膜色素上皮细胞（Retinal pigment epithelium,RPE）中Aβ蛋白及Aβ降解酶中性内切酶（Neprilysin,NEP）、Aβ合成酶β-分泌酶（BACE-1）的表达水平。2、细胞实验采用视网膜色素上皮-19细胞（Adult retinal pigment epithelium-19,ARPE-19）给予D-Gal处理,建立衰老模型,分为正常对照组、D-Gal不同浓度处理组。D-Gal实验组分别加入25、50、100、200mmol/L浓度的D-Gal,干预细胞24h。采用CCK-8法检测细胞活力、衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察细胞衰老情况、免疫荧光染色检测衰老的细胞中Aβ蛋白及Aβ降解酶NEP、Aβ合成酶BACE-1的表达水平、Western blot法检测细胞内Aβ降解酶NEP、Aβ合成酶BACE-1以及周期蛋白Cyclin E1（CCNE）、凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3的表达水平。结果一、动物实验1.ERG结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组引起小鼠视网膜功能损害,其中a波、b波振幅显著降低,差异具有统计学意义（P<0.01）。2.OCT检测结果显示,对照组视网膜各层结构完整,无异常表现,D-Gal实验组视网膜结构RPE层结构出现明显紊乱,并随着D-Gal的作用浓度增加而呈现明显的加重趋势。3.免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组视网膜RPE层的Aβ蛋白显著增加（P<0.01）。4.免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组视网膜RPE层的Aβ降解酶NEP显著降低（P<0.01）。5.免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组视网膜RPE层的Aβ合成酶BACE-1显著增加（P<0.01）。二、细胞实验1.CCK-8检测细胞活力结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞活力显著下降（P<0.01）,并具有剂量依赖性。2.衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞SA-β-Gal染色阳性率明显增多（P<0.01）,提示APPE-19细胞衰老模型建立成功。3.免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞中的Aβ蛋白表达显著增加（P<0.01）。4.免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞中Aβ降解酶NEP的表达显著降低（P<0.01）;Western blot结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞中Aβ降解酶NEP的表达显著降低（P<0.01）。5.免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞中Aβ合成酶BACE-1的表达显著增加（P<0.01）;Western blot结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞中Aβ合成酶BACE-1的表达显著增加（P<0.01）。6.Western blot结果显示,与对照组相比,D-Gal实验组ARPE-19细胞中周期蛋白CCNE的表达显著降低（P<0.01）;凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3表达显著增加（P<0.01）。结论1.D-Gal在诱导视网膜及ARPE-19细胞衰老过程中,通过抑制Aβ降解酶NEP,增强Aβ合成酶BACE-1,从而促进Aβ合成增多。2.在D-Gal诱导ARPE-19细胞衰老过程中,通过下调CCNE的表达和激活Cleaved-Capase-3,最终导致细胞损伤。这种损伤可能与细胞衰老过程中Aβ蛋白合成增多有关。