反义RNA和ChIFN-α对禽流感病毒作用效果研究

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高致病力禽流感不仅造成养禽业的巨大损失而且威胁人类健康。人传人的变异株一旦出现,将给人类带来一场巨大的灾难。目前,对患高致病力禽流感的动物主要采取扑杀的措施辅以疫苗免疫,而对于感染禽流感的人类主要采用药物治疗,人禽流感疫苗也在积极研制。但是,以目前疫苗和药物来应对禽流感的大流行是远远不够的。因而,研究新的抗禽流感病毒药物已迫在眉睫。 本研究通过对河南分离株的病毒学特性的研究,对HA、NA亚型测定和序列测定结果确定其属高致病力的H5N1亚型禽流感,并命名为A/Chicken/Henan/1/04。分别绘制了细胞和鸡胚上生长曲线,测定了细胞半数感染量(TCID<,50>)、鸡胚半数致死量(ELD<,50>)和鸡半数致死量(LD<,50>)。本毒株静脉接种指数高达为2.87,脑接种指数可达2。 用原核表达系统表达鸡α干扰素(ChIFN-α),并对其进行纯化,得到高纯度的重组蛋白。所表达ChIFN-α在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的抗病毒活性为3.16×10<6>U/mg。100 U的ChIFN-α可以100%的抑制禽流感在CEF上的繁殖;鸡胚上的实验表明:5000 u ChIFN-α可以100%的抑制禽流感病毒在鸡胚上的繁殖,1000 U可抑制80%的病毒复制,500 U能抑制20%的病毒复制;5000 U ChlFN-α可保护75%的SPF鸡幸免死亡。 针对禽流感的NA、M、PB1、PB2、NS、HA、NP、PA、NP和PA片断分别设计合成37种反义RNA oligo,其中NA7、PB1-10、NS2、NS27、NS526、NS705、NS混合组、HA110、NP739、NP1419、NP739、NP1419、PA134、NA280、M1,2-38、M1,2-83和M1,2-255可显著的抑制病毒的在CEF上的复制(P<0.05)。NS27、NS526和NS2+NS27+NS526+NS705在体内可抑制病毒繁殖,抑制效果为37.5%、50%和87.5%。饰斑实验和实时定量RCR实验对攻毒后24h的肺病毒量的检测结果也表明NS混合组可以显著地抑制病毒在肺中的繁殖。
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