冠状动脉疾病已经成为全世界人口发病率和病死率主要的原因。在导管室中，经皮冠状动脉介入(Percutaneous coronary intervention，PCI)进行冠状动脉支架植入术成为目前最常见和主要的医疗干预措施。但是仍然存在着一些大的缺点，如金属裸支架(Bare metal stents BMS)治疗的支架术后再狭窄(In-stent restenosis，ISR)可以影响到高达30％至40％的冠状动脉成形术，药物洗脱支架(Drug-eluting stents，DES)通过聚合物材料对附在上面的药物（如紫杉醇，雷帕霉素等）进行洗脱来防止血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖，可以大大降低ISR发生率至10％以下，也不能完全阻止ISR的发生，而且会损伤或延迟内皮化从而导致迟发支架内血栓形成，因此支架术后成功的血管重建要抑制VSMCs增殖和促进内皮化。　　 ISR形成的主要原因是由于VSMCs增殖和迁移所引起的新生内膜形成。在ISR的过程中，VSMCs在血管壁受损后由分化表型去分化转变为去分化表型，伴随的诸多生长因子释放也促进VSMCs去分化，从而影响VSMCs的增殖和迁移能力。在内膜损伤后，内皮细胞、血小板及炎症细胞释放生长因子、细胞因子等引起VSMCs由分化表型转变成去分化表型，细胞外基质(Extra cellular matrix，ECM)蛋白沉积，VSMCs由中膜向内膜迁移和增殖。VSMCs去分化并重新进入细胞周期，增殖率提高和迁移能力增强，同时VSMCs收缩蛋白标志物表达下降。VSMCs去分化后，其可迁移至内膜下，进行增殖和分泌大量的血管外基质。去分化的VSMCs在内膜中的增殖和迁移被认为可导致内膜增生的进展。血管外基质形成大量的内膜增生性损伤，可导致血管成形术后的再狭窄，这被认为是血管重建术失败的最常见的原因。这种瘢痕组织的生长是VSMCs增殖和迁移的结果，直接与支架植入术后的20％到30％的再狭窄率相关。　　 VSMCs表型转变的细胞内调控机制并没有完全阐明，但一些研究表明一些不同的信号转导通路参与了VSMCs表型转变，如PK3K/AKT、Ras/Raf/MEK/ERK1/2及P38MAPK等。Ras/Raf/MEK/ERK1/2信号途径参与了凝血酶引起的VSMCs分化。ERK和P38MAPK的激活参与了纤维母细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor， bFGF)、表皮生长因子(Epidermal growth factor，EGF)使SMC去分化的过程。也有研究认为，PI3K/AKT和Ras/Raf/MEK交叉调节的平衡决定了ERK1/2磷酸化情况，从而对VSMCs表型进行调控。因此，针对VSMCs表型转换的分子基础采取相应的对抗措施，降低ISR发生成为研究热点。脑利钠肽(Brain natriuretic peptide，BNP)由心室肌细胞产生，当心室壁受到牵张和舒张末期容积增大时，其表达量增加。在从心室肌分泌的过程中，proBNP按1∶1的比例裂解成为含有32个氨基酸且具有生物活性的BNP。BNP浓度升高可以改善心肌舒张，通过对抗血管收缩、钠潴留及激活的肾素-血管紧张素-醛固酮系统的抗利尿作用，在心室容积急性升高过程中起着非常重要的作用，BNP已经被认为是心血管疾病尤其是HF的生物标志。BNP通过PAR抑制了AngⅡ诱导的活性氧产生，抑制了VSMCs的增殖，也明显抑制血清引起的VSMCs增殖，同时BNP抑制氧化低密度脂蛋白引起的VSMCs迁移。因VSMCs的迁移和增殖能力的改变常伴随着其表型转变，BNP可能参与了VSMCs的表型转变。　　 因此，本课题拟以人VSMCs为研究对象，探讨BNP对其表型转换的影响以及这种作用是否通过激活P38、ERK信号转导通路完成，并探讨PI3K/AKT信号通路在BNP对VSMCs表型转变调控中的作用，为实现BNP在临床上应用于抗支架术后再狭窄提供理论依据。　　 材料与方法　　 1.人主动脉VSMCs，在含10％胎牛血清的DMEM培养液中常规培养，2～3d传代一次，传至5-7代作为去分化表型VSMCs，利用低血清(1％FBS)培养2-3天的VSMCs作为分化表型VSMCs用于实验。　　 2.实验设置:分化组(分化表型VSMCs)、去分化组(去分化表型VSMCs)、去分化表型VSMCs+10-8mmol/LBNP组、去分化表型VSMCs+10-7mmol/L BNP组、去分化表型VSMCs+10-6mmol/L BNP组，分别在加入BNP后24h和48h后收集细胞，进行VSMCs的SMα免疫组化染色、SMα及SM-MHC的Western blot检测。　　 3.10-7mmol/L BNP处理去分化VSMCs，在0min、5min、10min及15min行Western blot检测P38、ERK及PI3K/AKT信号通路蛋白表达。　　 4.加入P38及ERK信号通路阻断剂SB203580/PD98059，10-7mmol/L BNP处理去分化VSMCs48h后进行VSMCs的SMα免疫组化染色、SMα及SM-MHC的Westem blot检测。　　 5.计量资料数据结果以均数±标准差表示，多个样本均数的比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，组间比较用Dunnett及LSD检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。采用SPSS11.5统计软件包对数据进行统计分析。　　 结果：　　 1.去分化VSMCs的SMα及SM-MHC表达量较低，而血清饥饿诱导分化VSMCs较去分化VSMCs的SMα及SM-MHC表达量明显增加(P＜0.01)。　　 2.不同浓度的BNP均促进去分化VSMCs的SMα及SM-MHC的表达。10-7mmol/LBNP处理24h及48h的去分化VSMCs的SMα及SM-MHC表达量均高于去分化VSMCs(P＜0.01)。在24h或48h时间点，10-7mmol/L BNP处理的去分化VSMCs的SMα及SM-MHC表达量均高于10-8mmol/L和10-6mmol/L BNP处理的去分化VSMCs的SMα及SM-MHC表达量。10-7mmol/L BNP处理48h的去分化VSMCs的SMα及SM-MHC表达量高于10-7mmol/L BNP处理24h的去分化VSMCs的SMα及SM-MHC表达量(P＜0.05)。　　 3.10-7mmol/L BNP处理去分化VSMCs，P-AKT表达略有降低，但各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05); P-P38在5min及10min时表达增加(P＜0.01），而10min时的表达量高于5min时的表达量（P＜0.05），15min时的表达量接近于0min的表达量;P-ERK表达逐渐增加，在5min及10min时间点上最明显，而10min时的表达量高于5min时的表达量(ERK1(∶)P＜0.05;ERK2(∶)P＜0.01)。　　 4.P38抑制剂SB203580、ERK抑制剂PD98059对BNP诱导的去分化VSMCs的分化均有明显的抑制作用，加入阻断剂的BNP组VSMCs的SMα及SM-MHC表达较BNP组明显下降。　　 结论：　　 1.通过对传代的VSMCs进行血清饥饿诱导可建立用于阳性对照的分化VSMCs。　　 2.BNP可以促进去分化VSMC的分化表型标志物SMα及SM-MHC表达。　　 3.P38及ERK信号转导途径可能是BNP促进去分化VSMCs表型转变的重要机制。