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目的:(1)核素标记:研究放射性核素碘(131I)标记表皮生长因子受体(EpidermalGrowth Factor Receptor EGFR)单克隆抗体(McAb)1H12的实验条件。(2)外实验:观察标记产物131I-1H12与A549人肺癌细胞的免疫结合及其生物学效。(3)体内实验:观察记产物131I-1H12在体内对人肺癌A549裸鼠移植瘤的治疗及显像作用,探讨其靶向治疗肺癌的有效性和可行性。
方法:(1)核素标记:用Iodogen法标记1H12;用葡聚糖凝胶G-50(SephadexG-50)层析柱进行分离;以生理盐水纸层析法测定放射化学纯度。(2)体外实验:经体外细胞结合试验分析检测标记抗体的免疫活性;通过流式细胞仪检测不同剂量(148、74、37kBq)131I-1H12,游离131I(148kBq)及1H12(80nmol/ml)对A549细胞的作用。(3)体内实验:建立表达表皮生长因子受体的人肺癌荷瘤裸鼠模型;取36只裸鼠模型分为6组,分成高剂量组(14.8MBq131I-1H12)、中剂量组(7.4MBq131I-1H12)、低剂量组(3.7MBq131I-1H12)治疗组、单纯核素组(7.4MBq131I)、单纯抗体组(1H120.4ml)、空白对照组,观察肿瘤生长增殖情况,131I-1H12对正常组织脏器的放射毒副作用,治疗期间通过SPECT显像观察放射性药物在肿瘤中的浓聚作用。
结果:(1)核素标记:131I-1H12标记率为50.14%,比活度为4.63MBq/ug,放射性浓度为77.31MBq/ml,放射性化学纯度为96.92%。(2)体外实验:131I-1H12与A549细胞结合率为61.12%;131I-1H12诱导A549细胞凋亡和周期阻滞呈剂量-效应关系,以148kBq131I-1H12作用效应最大,凋亡率达到(44.35±3.31)%,G2/M期细胞阻滞率达(51.17±2.98)%。(3)体内实验:自第1次给药至第32天各时间段,高剂量组、中剂量组、低剂量组与空白对照组肿瘤体积差异有统计学意(P<0.01);裸鼠各组肿瘤抑制率分别为高剂量治疗组14.89%,中剂量治疗组20.14%,低剂量治疗组39.58%,单纯核素组76.32%,单纯抗体组88.76%,空白对照组99.73%,差异有统计学意义(P<0.01);光学显微镜下见高、中、低剂量组肿瘤细胞发生不同程度坏死;未发现肝、肾和骨髓非特异性放射损伤;SPECT显像示治疗期间放射免疫治疗各组肿瘤部位放射性浓聚。
结论:(1)核素标记:成功完成了131I对1H12的标记,该标记方法简单、稳定性好。(2)体外实验:131I-1 H12能够与A549细胞发生免疫结合,并调控细胞周期和诱导细胞凋亡。(3)体内实验:131I-1H12各组对A549人肺癌裸鼠移植瘤有明显剂量依赖性抑制作用,且无明显毒副作用。