兔胆粉和熊胆粉成分分析及药理作用比较研究

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熊胆为熊科动物黑熊(Selenarctos thibetanus Cuvier.)或棕熊(Ursus arctos L.)的干燥胆。现在制剂中均以引流熊胆粉代替野生熊胆,从一定程度上缓解了临床用药和动物保护之间的矛盾,但并没解决根本问题,寻找熊胆代用品已成为亟待解决的问题。兔胆在性味归经上与熊胆相近,且化学成分及药理作用相似,且兔胆易于获取,来源稳定,价格低廉,这都为熊胆代用品研究提供了可能。本文以熊胆粉为对照,比较了兔胆粉和熊胆粉在生药学鉴别上的异同,采用薄层层析法比较了两种胆粉所含胆汁酸成分的差别,通过LC-MS、FT-IR法比较了两种胆粉主要成分的异同;本文采用硫酸-糠醛反应对兔胆粉和熊胆粉中总胆汁酸含量进行测定,采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量,采用电感耦合等离子体光谱仪测定元素含量;体内药理实验部分,本文采用氨水引咳法和酚红排泌法,对兔胆粉和熊胆粉镇咳祛痰作用进行考查,采用热板法、醋酸扭体法考查两种胆粉镇痛作用,采用二甲苯致小鼠耳肿胀法考查两种胆粉的抗炎作用。实验结果如下:通过对兔胆粉及熊胆粉进行性状、显微、理化、薄层层析法鉴别,能从一定程度上对两种胆粉进行区分,采用薄层层析法,发现两者在组成上有一定差异;采用LC-MS法、RP-HPLC法及FTIR法对两种胆粉进行分析,结果显示兔胆粉中以去氧胆酸为主、其次还含有胆酸、鹅去氧胆酸;熊胆粉中含有熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸和胆酸;采用硫酸-糠醛反应测定两种胆粉中总胆汁酸含量,以胆酸量计总胆汁酸含量,兔胆粉和熊胆粉中总胆汁酸含量分别为23.33%,16.45%,以熊去氧胆酸计总胆汁酸含量,两种胆粉中总胆汁酸含量分别为10.03%,25.51%。氨基酸含量测定,结果发现两种胆粉在氨基酸种类上有差异,兔胆粉中仅色氨酸未检出,熊胆粉中色氨酸、组氨酸和异亮氨酸3种未检出。检出的氨基酸中,除天冬氨酸、谷氨酸、缬氨酸、亮氨酸、酪氨酸这几种氨基酸熊胆粉中含量高外,其余氨基酸含量兔胆粉中高;微量元素含量测定结果表明,Ca、Fe、K、Mg、Mn、Zn这几种元素兔胆粉含量高与熊胆粉,Na、Cu的含量熊胆粉中高,两种胆粉中均未检出重金属元素Cd、Pb。镇咳祛痰结果表明两种胆粉均有一定的镇咳效果,能明显提高咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,且镇咳效果与给药剂量存在一定正相关性;两种胆粉祛痰效果较好,药理作用相似。镇痛作用结果表明两种胆粉均有一定的镇痛作用,能够提高痛阈值,减少扭体次数,抗炎作用,结果发现两种胆粉均有一定抗炎作用,且兔胆粉的镇静效果较熊胆粉的要好。综上所述,本文得出如下结论:通过生药学比较,兔胆粉和熊胆粉存在一定差别,结合几种色谱和光谱方法测定的结果,兔胆粉和熊胆粉中所含的主要成分有相同组成,也存在差异,且兔胆粉中含有的物质种类较熊胆粉中多,对其组成成分需作进一步分析;两种胆粉氨基酸种类及数量无明显差别,但兔胆中含的种类和数量较熊胆中多;两种胆粉中均不含Cd、Pd等有毒元素,兔胆中所含的种类和数量较熊胆多。药理实验结果表明两种胆粉均有一定的镇咳、祛痰、镇痛及抗炎效果,除了抗炎作用外,药理作用效果与剂量呈一定的正相关性。在镇咳、祛痰、镇痛方面,两种胆粉药理作用相似,无明显差异;而抗炎作用,兔胆较熊胆的效果好。
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