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抑郁症是发病率最高的精神疾病,因具有高患病、高复发、高致残和高致死率,已成为严重的公共卫生难题[1]。随着经济社会持续高速发展,抑郁症呈现明显流行态势,我国约有抑郁症患者5500万人[2]。尽管有多种发病假说相继提出,但其病理机制仍不清楚,药物干预是治疗抑郁的最重要手段,但目前一线化学药物仍存在有效率低、起效慢、副作用突出等局限性。抑郁症属中医郁证、情志病范畴,基于多靶标整体调节的中医药在抑郁症防治中具有独特优势[3],由于对其物质基础和作用机制的科学认识有限,致使我国抗抑郁创新中药长期处于空白。随着近年来巴戟天寡糖、舒肝解郁胶囊等抗抑郁中药的陆续上市,中药在抑郁症等精神疾病治疗领域的优势正在逐渐体现并得到国际社会的认同[4]。结合现代药理学手段和中医药理论,推出更好的抗抑郁中药具有重要意义。白芷、冰片、川芎均为常用中药,中医临床常配伍用于头痛、脑血管意外等多种神经精神疾病治疗,对中枢神经递质有调控作用。本研究采用行为药理学、神经化学和神经生物学等多种研究手段,评价白芷及白芷冰片方、白芷川芎方是否具有抗抑郁作用,并选择具有明确抗抑郁作用的组方进一步研究其抗抑郁作用的神经生物学机制。一、白芷、白芷川芎方、白芷冰片方的抗抑郁作用评价与筛选采用小鼠急性应激模型包括小鼠悬尾和强迫游泳实验以及LPS诱导抑郁模型评价筛选评价白芷、白芷冰片方、白芷川芎方的抗抑郁活性。结果显示,白芷单次给药（9g/kg,i.g.）对强迫游泳实验和悬尾实验小鼠不动时间有显著缩短作用;白芷冰片方单次给药（3+0.017g/kg,9+0.05g/kg）可显著缩短强迫游泳和悬尾实验小鼠不动时间,且白芷冰片方（9+0.05g/kg）作用显著强于白芷单味药（9g/kg）;白芷川芎方（0.5g/kg）单次给药可缩短悬尾实验和强迫游泳实验中小鼠不动时间;在LPS诱导抑郁模型中,白芷冰片配伍（3+0.017g/kg,9+0.05g/kg）可显著逆转LPS引起小鼠悬尾实验不动时间延长,同时（9+0.05g/kg）可显著逆转小鼠强迫游泳不动时间延长,而白芷川芎方在LPS诱导模型中作用不显著;两复方在抗抑郁有效剂量范围内不影响正常小鼠自发活动。以上实验表明,白芷冰片配伍可降低白芷的起效剂量,有一定的增效作用,并且白芷冰片方在多种模型中有抗抑郁作用更为明显。二、白芷冰片方抗抑郁行为学效应研究采用小鼠习得性无助模型和大鼠慢性应激模型进一步评价白芷冰片方的抗抑郁活性。结果显示,白芷冰片方高剂量（9+0.05g/kg）连续灌胃给药2-4 d可显著降低习得性无助模型小鼠的逃避失败次数和逃避潜伏期,低剂量（3+0.017g/kg）在给药第3天显著降低逃避失败次数;白芷冰片方（9+0.05g/kg）连续给药5周可逆转慢性应激大鼠在开场实验中的探索行为减少和活动能力减弱、蔗糖饮水实验蔗糖偏嗜度降低、新奇抑制摄食实验摄食潜伏期的延长等抑郁样行为。三、白芷冰片方的抗抑郁作用机制研究围绕抑郁症的发病假说对白芷冰片方的抗抑郁作用展开研究:（1）采用包括5-羟色氨酸诱导的甩头实验、对氯苯丙氨酸耗竭5-HT实验、育亨宾毒性增强实验和利血平拮抗模型在内的药物相互作用模型观察白芷冰片方对中枢单胺系统功能的影响,采用高效液相色谱检测白芷冰片方对利血平拮抗模型小鼠脑内单胺递质及其代谢产物的影响。（2）采用蛋白印迹法检测白芷冰片方对习得性无助小鼠和慢性应激模型大鼠海马酪氨酸激酶B（TrkB）、脑源性神经营养因子（BDNF）的、磷酸化CREB（p-CREB）蛋白表达水平的影响。（3）采用酶联免疫法检测白芷冰片方对LPS诱导抑郁模型小鼠脑内炎症介质表达水平的影响,采用蛋白印迹法检测白芷冰片方对LPS诱导抑郁模型小鼠脑内小胶质细胞激活的影响。（4）利用高效液相色谱质谱联用（LS-MS）检测比较白芷和白芷冰片方灌胃给药后大鼠体内呋喃香豆素类化合物在血和脑内组织的分布水平差异。结果显示:（1）白芷冰片方（9+0.05g/kg）灌胃给药可显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数;PCPA预处理可取消白芷冰片方在小鼠悬尾实验中的作用;同时白芷冰片方可拮抗利血平诱导小鼠眼睑下垂,但对肛温下降和运动不能症状无显著影响,也不能增加育亨宾引起的毒性反应。高效液相色谱分析结果表明,白芷冰片方可显著增加利血平模型小鼠脑内5-HT及5-HT转换率（5-HIAA/5-HT的比值）。（2）Western blot结果表明白芷冰片方可显著增加习得性无助小鼠和慢性应激大鼠海马BDNF及其受体TrkB的表达水平,并可显著促进CREB的磷酸化。（3）白芷冰片方可显著降低LPS模型小鼠海马炎症介质TNF-a、IL-1β、IL-6的表达水平,同时抑制LPS诱导的小胶质细胞的激活。（4）白芷冰片方组大鼠血、海马和前额叶皮层欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯浓度均高于白芷单味药组大鼠,而其在海马、前额叶皮层的组织血液分布一致即组织血浆分配系数大致相同。综上药理学研究表明:白芷及其与川芎、冰片分别配伍均具有抗抑郁样作用,且白芷冰片方抗抑郁作用优于白芷川芎方和白芷单味药,冰片的增效作用与增加白芷主要化学成分的血药浓度和生物利用度可能有关。进一步机制研究发现,白芷冰片方在多个抑郁模型上表现出显著的抗抑郁作用可能与增强脑内5-HT能神经系统的功能、上调海马BDNF/TrkB/p-CREB的表达水平、减轻中枢炎性损伤有关。