利用SSR标记技术对白桦长纤维性状的研究

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白桦(Betula platyphylla)为我国东北与内蒙古林区的先锋树种,是非常优良的短周期阔叶纸浆用材树种。纤维长度是影响纸张品质的主要因素之一,为了加速长纤维白桦纸浆材新品种选育进程,本文进行了以下研究:1、通过测定和分析帽儿山实验林场583株白桦和哈尔滨林场200株白桦纤维长度的分布特点,不仅说明纤维长度性状是典型数量性状、适合采用分子标记技术进行研究,而且分别从中选择出能代表这2个群体的100株个体组成分析群体用于长纤维性状分子标记分析、40株验证群体用于长纤维标记的验证。2、通过正交设计方法确定了SSR反应体系,并对结果进行了验证。在正交设计的基础上,得出了白桦SSR最佳反应体系。20μL反应体系包括:DNA100ng,Mg+23mmol/L,Taq酶0.5U,dNTP 0.5mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L;循环参数为:94℃预变性5min后,进行35个循环94℃变性30s,59.5℃复性30s,72℃延伸30s;72℃延伸5min,4℃保存。3、利用生物信息学方法,分析了NCBI数据库的2548条欧洲白桦(Betula pendula)EST序列,结果表明:其中共有260条EST序列含有307个SSR,占全部EST的10.20%,SSR的出现频率是12.05%。利用SSR Primer和Primer3软件对发现的260个含有SSR序列的EST序列进行东北白桦SSR引物设计,结果表明:在Primer3设计出的176对引物,共有104对引物产生扩增现象,占合成引物的59.09%,其中27对引物具有多态性,仅占25.96%;在SSR Primer设计的100对引物,有37对引物产生了扩增产物,占合成引物的37.00%,其中只有18对引物的扩增具有多态性。4、通过纤维长度与SSR标记的多元回归分析,得到了4条与白桦纤维长度呈显著相关SSR片段扩增条带。利用与这4条片段对应的SSR引物对验证群体进行扩增结果表明,4对长纤维性状SSR引物对长纤维白桦的鉴定率平均为60.00%,对短纤维鉴定率为7.00%,其中PB15引物对长纤维性状个体的鉴定率高达75.00%。
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