研究目的： PDT是利用特定波长的光照射光敏剂使之产生有杀伤活性的自由基，杀伤细胞、组织从而达到治疗目的的一种新型治疗手段。苯卟啉单环酸A（BPD-MA）是一种卟啉类新型光敏剂，目前已在肿瘤、牛皮癣以及血管增生性疾病的治疗方面进入Ⅰ～Ⅱ期临床应用阶段。再狭窄（RS）是经皮冠状动脉成行术（PTCA）后平滑肌细胞迁移、异常增殖而致内膜增厚、管腔狭窄。将BPD-MA-PDT应用到RS的防治是一个新的课题。本研究的目的：（1）：观察BPD-MA在血管平滑肌细胞（VSMC）和内皮细胞（EC）中分布规律；（2）：观察VSMC功能状态改变对BPD-MA分布的影响；（3）了解BPD-MA的兔血药浓度的变化规律及在动脉组织中的代谢特性；（4）研究BPD-MA-PDT对损伤性内膜增生的疗效，为进一步应用BPD-MA建立一种适度而有效的PDT防治PTCA后RS的方法提供实验依据和研究方法。方法和结果 一、体外培养VSMC、EC并进行细胞鉴定，将细胞接种于24孔培养板，分组，培养液中加入BPD-MA，浓度分别为1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20ug/ml，分别在孵育即刻、15、30、60、120、180、240分钟用荧光分光光度法测定细胞内光敏剂的含量，分析孵育的药物浓度、时间对其吸收量的影响。SMC、EC对BPD-MA的吸收均呈浓度、时间依赖性。SMC对BPD-MA的吸收随药物浓度升高增加较快，当药物浓度为10ug/ml时即达到最大吸收，而当药物浓度达到18ug/ml后，才达到EC的最大吸 收值，在每个药物浓度下，SMC的吸收均高于EC。SMC、EC对药物的吸 收均随时间延长而上升，虽然二者同时到达平台期，但除即刻外，各时间 点 SMC中药物含量均高于 EC中功．05），在 60min时，SMC比 EC的药 物含量高约330o，在120min时，H者差距最大，SMC比EC高约355o。 二、SMC接种于培养扳上，贴壁后，低血清培养（2％胎牛血清）48 ’J’时使之进入 G。期，分组，生长因子处理组为在 DMEM液中加入 10％ 胎牛血清或血小板源性生长因子（PDGF），对照组继续用2％胎牛血清， 再孵育 12小时，暗室中加入 BPD－MA继续孵育 1小时后，采用荧光分光 光度法测定细胞内BPD－MA的含量。分析细胞功能状态改变对BPD．MA 吸收量的影响。结果显示：＊P卜＊A含量在P＊＊F组＞10％胎牛血清组＞2％ 胎牛血清组（P＜0刀5），其中＊＊＊F组细胞内的药物含量比2％＊＊S组高 约 400，100FBS组比 2oFBS组高约 18O。 三、麻醉新西兰白兔，抽取兔动脉血，离心后取血浆，加入BPD－MA， 使之成为标准浓度BPD－MA血浆稀释液后测定荧光强度，以药物浓度对 平均荧光值进行线性回归，得回归方程：Y＝0．0987X－0．759（：＝0．9971）。自 耳缘静脉注射 BPD－MA 2．sins八s体重，于注射后不同时间自股动脉取血， 离心后取血浆测定荧光强度，根据回归方程计算血浆药物浓度。取中等动 脉研磨成匀浆，加入BPD－MA，使之成为标准浓度BPD－MA匀浆稀释液， 测荧光值强度并进行线性回归，得回归方程Y＝0．088x－0．665（r＝0．9979）。 根据回归方程计算注射BPD＊A后不同时间动脉组织中BPD－MA的含 量，同法测损伤动脉组织中BPD＊A含量。结果显示：注射药物后即刻 血浆药物浓度为最高，药物浓度随时间的变化呈峰值一快速下降期一平 台期；动脉组织中药物含量的变化与血药浓度呈正相关，但三相变化不明 显，呈较为平缓的下降态势，二者从峰值到平台期的时间约为20min；注 射 BPD．MA后 40min和 80min两个时间点损伤动脉的药物含量与同期对 侧正常动脉比较已无显著性差异。 四、将新西兰白兔随机分为5组：（）对照组（n＝6）：单纯球囊损伤； （2）单纯用药组（n二6）：球囊损伤后单纯注射 BPD－MAZ．sing／kg体重；（3） 单纯照光组（n＝6）：球囊损伤后单纯照光，功率密度 30rnw／Cm’，能量密度 ．3．27J／cmZ；（4）治疗组 1（n＝6）：球囊损伤后先注射 BPD－MAZ．sing／kg体重，然后照光功率密度 30mw／cm‘，能量密度 27J／cm’；（5）治疗组 2（n。6）：球囊损伤后先注射BPD－MAZ．sing八g体重，然后照光功率密度90mw／cm‘，能量密度 81 J／cm‘。每组 6只，复方氯胺酮麻醉臼兔，自股浅动脉逆行球囊导管插入损伤腹主动脉下端和骼总动脉内膜，耳缘静脉注入BPD－MA，插入光纤进行血管内照射，正常饮食饲养21天后处死动物，取骼总动脉行病理切片。以计算机图象分析计算增生内膜面积与中膜面积比值的均