基于巨噬细胞M2型极化研究美洲大蠊活性部位CⅡ-3及其化学成分的免疫调节活性

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目的:体外建立巨噬细胞M2型极化模型,以能有效抑制巨噬细胞M2型极化为活性指标,验证美洲大蠊抗肿瘤活性部位CII-3,进一步探讨其中活性成分,研究是否通过免疫调节功能达到抗肿瘤转移的作用,从免疫学角度探讨美洲大蠊提取物抗肿瘤的。方法:1.LPS(1μg·mL-1)联合 IFN-γ(20ng·mL-1)诱导巨噬细胞株 RAW264.724h使极化为M1表型,IL-4(20 ng·mL-1)诱导巨噬细胞株RAW264.7和Ana-1 48 h使极化为M2表型。2.MTT法考察美洲大蠊提取物及活性部位中的化学成分对实验细胞株的存活率的影响,及条件培养基对CT26.WT细胞存活率的影响。3.RT-PCR法检测美洲大蠊提取物对M1/M2型极化巨噬细胞中M1型标志物iNOS及M2型标志物ARG-1和CD206 mRNA表达量的影响。4.ELISA法检测美洲大蠊活性部位CII-3和化合物pericanaside对M2型巨噬细胞细胞因子标志物TGF-β和IL-10表达的影响。5.流式细胞术检测CII-3和化合物pericanaside对M2型巨噬细胞标志物CD206的表达的影响。6.细胞免疫荧光方法检测CII-3和化合物pericanaside对M2型巨噬细胞标记物CD206荧光强度的影响。7.IL-4与CII-3及化合物pericanaside单独或共同孵育巨噬细胞,收集条件培养基,用不同条培组分别处理CT26.WT细胞,通过细胞划痕,transwell小室迁移实验检测肿瘤细胞的迁移能力。结果:1.美洲大蠊活性部位CII-3是抑制IL-4诱导的RAW264.7极化M2型巨噬细胞的标志物ARG-1和CD206 mRNA表达效果最佳部位(P<0.05)。2.CII-3中化合物pericanaside下调IL-4诱导的RAW264.7极化M2型巨噬细胞标志物ARG-1和CD206 mRNA表达水平(P<0.05)。3.RT-PCR,ELISA,流式细胞术,免疫荧光结果显示CII-3和化合物pericanaside抑制IL-4诱导的RAW264.7和Ana-1细胞极化M2型巨噬细胞的标志基因ARG-1和CD206和标志细胞因子TGF-β和IL-10的表达(P<0.05)。4.细胞划痕和Transwell小室实验结果显示CII-3和化合物pericanaside的条件培养基具有抑制肿瘤细胞CT26.WT迁移的作用(P<0.05)。结论:1.CII-3中化合物pericanaside对M2型巨噬细胞抑制效果最强,对M1型巨噬细胞无明显影响。2.CII-3和化合物pericanaside通过抑制巨噬细胞M2型极化发挥抗肿瘤转移的作用。
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