本研究对藏系绵羊皮肤特异性表达基因KROX20的编码区序列及其对细胞内信号分子表达的影响进行分析,为进一步研究KROX20基因对藏系绵羊毛囊发育和毛发生长等过程的影响奠定基础。首先,试验采集了藏系绵羊的皮肤组织,从皮肤组织中克隆了KROX20基因的编码区序列,并对其编码区序列和氨基酸序列进行生物信息分析。然后,用Transfer-PCR（TPCR）方法构建了KROX20基因的重组皮肤特异表达载体,用构建的载体转染体外培养的绵羊毛乳头细胞（Dermal Papilla Cell,DPC）并对细胞转染条件进行了探索、优化。最后,利用荧光定量PCR及Western blot技术检测KROX20基因及其下游靶基因IGFBP5在m RNA和蛋白质水平的表达情况。本研究的主要结果如下:1.实验克隆得到了藏系绵羊KROX20基因的CDS区序列,其序列长度为1458 bp。该基因测序序列与普通绵羊KROX20基因预测序列相比（XM＿02796224.1）,CDS区长39 bp（长在CDS的起始部位）,匹配序列的相似性为99.51%,存在7个碱基差异（不包括长出部分的39个碱基）。藏系绵羊KROX20基因序列的碱基统计结果,碱基A、C、G、T分别占18.90%、37.70%、26.30%和17.10%。藏系绵羊KROX20基因测序序列推导的氨基酸序列,编码486个氨基酸,理论等电点为9.13,相对分子量为51.37 k D。与普通绵羊氨基酸序列（XP＿027818049.1）的匹配序列相似性为99.85%,存在2个氨基酸差异（不包括多编码的13个氨基酸）。藏系绵羊KROX20氨基酸序列中存在3个C₂H₂锌指结构域,其位置分别在该蛋白的350-374、380-401和408-429处,其氨基酸序列与绵羊、山羊相同,在其它动物中也存在类似锌指,但序列同源性不高。2.用Transfer-PCR（TPCR）方法成功构建了KROX20基因的重组皮肤特异表达载体pCDsRED-KROX20。将该重组p CDs RED-KROX20载体瞬时转染培养的绵羊毛乳头细胞,其转染效率为30.5%左右,最佳转染时间为48 h,载体与脂质体的最佳比列为1:3。3.荧光定量PCR检测表明,转染重组真核pCDsRED-KROX20的绵羊毛乳头细胞中,KROX20基因超表达约45倍,KROX20基因下游靶基因IGFBP5的m RNA水平上调约7.5倍。进一步用Western blot检测KROX20和IGFBP5蛋白的表达情况,两种蛋白质的表达量均极显著上调。这些结果表明,KROX20基因有可能通过IGF信号通路,影响藏系绵羊皮肤毛囊发育和毛发生长。