氨基酸是组成人体蛋白质最基本的结构单元，自身及其衍生物常作为药品和保健品的原料使用。除甘氨酸外，其它氨基酸都具有D型和L型手性之分。人体能够代谢的氨基酸为L-氨基酸，对D-氨基酸的食用可能存在某些潜在的危害。因此，对氨基酸手性分离研究意义重大。配体交换手性固定相法特别适用于氨基酸的手性分离。手性固定相对分离效果的好坏起着至关重要的作用。它包括三个部分——载体、偶联剂和手性选择剂。目前，载体常选用硅胶，偶联剂常选用KH-560，而手性选择剂有L-氨基酸、酒石酸、丙二胺、麻黄碱等诸多手性化合物可供选择。如何提高手性固定相的选择性，是一个值得不懈追求的目标。本文以L-氨基酸作为手性选择剂，研究顺序键合、逆序键合两种方式制备氨基酸类配体手性固定相时的影响条件和规律。顺序键合制备手性固定相的研究中主要探讨了合成条件对偶联硅胶生成的影响规律；偶联剂KH-560上甲氧基参与键合反应的程度；氨基酸的酸碱性对合成手性固定相的影响规律。逆序键合制备手性固定相的研究中主要探讨了L-组氨酸与偶联剂KH-560反应液液相色谱分离检测条件；目标产物和副产物的检测分析；最后按两种键合顺序制得手性固定相，通过氮含量的高低比较两种键合方式的优劣。并得出以下主要结论：1）合成偶联硅胶反应条件的研究表明：KH-560用量的增加，反应温度的上升、反应时间的延长均能促进硅胶和KH-560的键合。KH-560在反应温度高于90℃时，会发生分解。反应时间延长会促进KH-560的分解。为避免KH-560的分解产物对偶联硅胶品质的影响，适宜于硅胶和KH-560键合反应的条件为：硅胶:KH-560=1:2（质量比）；反应温度65℃~80℃；反应时间60h~84h。在此反应条件范围内，KH-560分子上只有1个甲氧基参与了反应。2）在被研究的三类氨基酸中，只有碱性氨基酸（L-组氨酸）能直接与偶联硅胶反应生成手性固定相。溶液pH的上升，不仅能促进L-组氨酸与偶联硅胶的反应，还能激活L-丙氨酸和L-谷氨酸与偶联硅胶的反应。能使L-组氨酸和L-丙氨酸的转化率达到80%，使L-谷氨酸转化率达到75%。适宜于氨基酸与偶联硅胶反应的条件是：室温，反应时间不低于48h；反应溶液pH=10～11。3）逆序键合制备手性固定相的研究表明：KH-560分子上Si-OCH3在水溶剂中会发生水解生成Si-OH。两分子水解物之间会进一步发生聚合生成二聚物。L-组氨酸与KH-560在水溶剂中的反应实质上是L-组氨酸与KH-560水解产物及水解聚合物的反应。甲醇含量的提高有助于抑制KH-560水解，甲醇含量>15%（体积比），对KH-560水解的抑制效果趋于稳定。采用逆序键合方式制备手性固定相比顺序键合更有利于手性选择剂含量的提高。