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糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是世界各国日益关注的公共健康问题。糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)是导致DM患者失明的最主要、最严重、且治疗最为棘手的并发症,也是世界四大致盲眼病之一。补肾活血方(地黄、丹参、人参、葛根配伍组成)由本课题组成员研制并获得发明专利,前期临床和药理学实验均表明补肾活血方用于防治DR,效果良好。课题组前期对补肾活血方中各单味药材人参、丹参防治DR药效物质进行了研究。在前期研究的基础上,本文基于多维谱效关系开展补肾活血复方防治DR药效物质基础的实验研究,研究结果将为开发具有自主知识产权的防治DR中药新药奠定基础。采用均匀设计法获得12批补肾活血方样品,应用HPLC-UV-ELSD建立12批样品指纹图谱并通过聚类分析评价12批样品的差异性。结果表明:在其HPLC-UV指纹图谱中标定了23个共有峰,其中1~15、17、21号峰来源于葛根,18~20、22、23号峰来源于丹参,16号峰为丹参和葛根共有。在其HPLC-ELSD指纹图谱中标定了14个共有峰,其中1’~7’号峰来源于葛根,8’号峰来源于丹参,9’~14’号峰来源于人参。通过与对照品比对指认出复方中7个成分,分别是6/4’号峰为葛根素,22/8’号峰为丹酚酸B,10’号峰为人参皂苷Rg1,11’号峰为人参皂苷Rb1,12’号峰为人参皂苷Rc,13’号峰为人参皂苷Rb2,14’号峰为人参皂苷Rd。对12批样品进行聚类分析,补肾活血方HPLC-UV指纹图谱中,12批供试品被分为5类,补肾活血方HPLC-ELSD指纹图谱中,12批供试品被分为3类。采用高脂饲料+链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导大鼠DR模型,病理组织检测大鼠视网膜结构的变化;免疫组化检测大鼠视网膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和低氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;Elisa法检测大鼠血浆中糖基化终末产物(Advanced glycationend products,AGEs)的含量。眼球HE染色结果表明:与正常对照组相比,模型组大鼠眼球视网膜组织出现明显的外网层及内核层新生毛细血管增多,毛细血管微血栓形成,血管周围细胞排列紊乱,节细胞变性或坏死,视神经纤维层明显增厚,神经纤维水肿、变性等病理性损伤,提示大鼠DR模型构建成功。与模型组相比,各给药组病变程度均有所减轻,提示各给药组均有一定治疗作用。视网膜消化铺片结果表明:与正常对照组相比,模型组内皮细胞数和周细胞数比值明显升高,具有极显著性差异(P<0.01);与模型组相比,各给药组内皮细胞数和周细胞数比值明显降低,具有极显著性差异(P<0.01)。免疫组化结果表明:与正常对照组相比,模型组大鼠视网膜中积累了大量的VEGF、HIF-1α蛋白,其光密度急剧增加,且具有极显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,各给药组大鼠视网膜中两者的积累量均有不同程度的降低,表明12批补肾活血方对DR均具有一定的治疗作用。Elisa检测结果表明:与正常对照组相比,模型组大鼠血浆中AGEs浓度升高,具有显著性差异(P<0.05)。与模型组相比,各给药组大鼠血浆中AGEs浓度均有不同程度的降低。采用TOPSIS法对12批补肾活血方防治DR药效作用进行综合分析评价,结果表明原方组和给药组2防治DR效果最好。采用偏最小二乘法(Partial least squares regression,PLSR)研究12批补肾活血方中各共有峰峰面积与DR大鼠中VEGF、HIF-1α和AGEs的相关性,找出对“效”有贡献作用的药效成分,建立补肾活血方的多维谱效关系模型。结果表明:葛根素、丹酚酸B、人参皂苷Rd及1个尚未确定结构的成分(峰20)为补肾活血方防治DR的可能药效物质。本文基于多维谱效关系探讨了补肾活血方防治DR的药效物质基础,为补肾活血方的进一步研究与临床应用提供了依据,也为开发防治DR的中药新药奠定了基础。