I型糖尿病(Type 1 Diabetes, T1D)是由于自身免疫耐受机制被打破而引发的自身免疫病。遗传、环境、病毒感染、免疫功能异常等因素均能引发糖尿病。利用自身抗原在I型糖尿病发病前期进行免疫干预,以期减缓或阻止胰岛中自身免疫的过程,对T1D发挥预防作用,是目前研究的一个热点。非肥胖型糖尿病小鼠(non-obese diabetic,NOD)能自然发生I型糖尿病,在疾病早期(3-4周龄)发生胰岛炎,进行性破坏胰岛p细胞,12周龄开始出现临床症状,30周龄雌鼠累计发病率可达80%,是目前研究I型糖尿病的主要动物模型。在NOD小鼠I型糖尿病病程中,启动抗原是胰岛素(insulin),特异性CD8+T细胞毒T细胞发挥着重要作用。InsulinB 15-23(简写为InsB15-23)是H-2Kd限制性的优势表位,该抗原肽与亲和力很低。为了研究InsB15-23表位在T1D病程中的作用,前期本实验室引入了二硫键捕获型单链三聚体技术提高InsB15-23和H-2Kd的亲和力,构建了膜表达型InsB15-23H-2KddtSCT(简写为mdtSCT)真核表达载体,该载体能够过表达mInsB15-23H-2Kd分子。用该载体和弗氏佐剂一起皮下接种3周龄NOD雌鼠,意外发现能降低NOD小鼠I型糖尿病发病率,胰岛局部单个核细胞的浸润程度大大减轻。深入研究过表达mInsB15-23 dtSCT的免疫保护作用和阐明其具体机制,为T1D等自身免疫病的干预治疗提供一个新思路。在以往研究的基础上,我们试图研究NOD小鼠过表达mInsB15-23H-2Kd产生的免疫保护作用机制,是否通过直接作用导致CTLs凋亡,减少特异性CTL数量?或者通过Th细胞亚群的分化间接影响特异性CTL数量和功能?为了排除弗氏佐剂对实验的影响,我们首先单用mInsB15-23 dtSCT真核表达载体皮下连续免疫3周龄的NOD雌鼠,连续监测血糖,发现30周龄时平均血糖和发病率均下降,胰岛炎分级评分发现实验组胰岛中单个核细胞浸润程度降低,证实单纯利用mInsB15-23 dtSCT真核表达载体进行早期免疫干预能够延缓T1D疾病进程,降低发病率,对NOD鼠具有免疫保护作用。CD8+T细胞和CD4+T细胞是介导T1D发生的主要效应细胞,我们重点研究过表达mIns15-23H-2Kd-SCT是否通过直接或间接作用调控T细胞亚群发挥免疫保护作用的。利用自己制备的InsB15-23dtSCT四聚体检测NOD小鼠体内insulin特异性CD8+T细胞。Insulin特异性CTL在NOD鼠3-4周龄时开始出现,随NOD鼠周龄增加,会被其他抗原特异性CTL取代。我们在特异性InsB15-23CTL出现的时相内选取6周龄,8周龄和10周龄三个时间点分析NOD鼠体内CTL频率,发现过表达mIns15-23H-2Kd能够降低6周龄NOD小鼠体内特异性CTL频率,说明过表达mInsB15-23H-2Kd能够减少NOD小鼠特异性InsB15-23CTL数量,进而影响抗原表位扩展。通过分析NOD小鼠T1D疾病进程中T11细胞的变化,我们发现过表达mInsB15-23H-2Kd的NOD鼠在糖尿病前驱期(12周龄和16周龄),体内Thl细胞频率显著降低,而16周龄时Th2细胞频率增加,但整个过程具有负向调控作用的Treg细胞却没有明显变化,说明接种mInsB15-23 dtSCT重组质粒能够影响Thl细胞和Th2细胞之间的平衡,而与Treg细胞数量无关。过表达mInsB15-23H-2Kd减少NOD小鼠特异性InsB15-23CTL数量、促进Th2细胞分化的具体机制尚有待进一步研究。