【摘 要】
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目的:基于发色底物法原理,建立一种精密度高、线性范围宽且稳定性好的蛋白C（protein C,PC）活性检测体系,并对其进行检测性能评估和方法学比较。收集临床标本,对该检测体系在下肢深静脉血栓形成中的临床应用价值进行评估。方法:1.基于发色底物法原理,建立一种测定人血浆PC活性的检测体系。选取蛋白C激活剂protac②,发色底物Pefachrome②PCa5297分别作为试剂1液（R1）和试剂2液
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目的:基于发色底物法原理,建立一种精密度高、线性范围宽且稳定性好的蛋白C（protein C,PC）活性检测体系,并对其进行检测性能评估和方法学比较。收集临床标本,对该检测体系在下肢深静脉血栓形成中的临床应用价值进行评估。方法:1.基于发色底物法原理,建立一种测定人血浆PC活性的检测体系。选取蛋白C激活剂protac②,发色底物Pefachrome②PCa5297分别作为试剂1液（R1）和试剂2液（R2）的主要成分。通过系列浓度梯度试验摸索二者最佳浓度配比,并对试剂盒中的其他成分进行探索。选择北京众驰伟业XL-3200c全自动凝血仪作为检测仪器,摸索和优化试剂盒在该仪器上的检测参数。同时选用德国Siemens公司的Berichrom PROTEIN C试剂盒和日本Sysmex公司的CN-6000全自动血液凝结分析仪,作为测试比对系统。通过配制系列浓度的PC标准品溶液,建立两种检测体系的标准曲线。2.对自建PC检测体系进行性能评估。用重复测定的变异系数CV表示不精密度,取正常和低水平的质控血浆和正常人混合血浆,评估自建PC检测体系的不精密度。同时评价其灵敏度、线性范围、携带污染率和稳定性,并使用该检测体系对152例表观健康者的血浆标本进行检测,以建立参考区间。3.收集临床标本,对自建PC检测体系与Siemens检测体系进行方法学比较。选取2020年11月至2021年6月于青岛大学附属医院首次确诊的68例下肢DVT患者（病例组）和80例表观健康者（对照组）的血浆标本,采用自建PC检测体系和Siemens检测体系分别检测两组血浆标本的PC活性,对检测结果进行相关性分析和Bland-Altman一致性分析,并采用ROC曲线比较两种检测体系对下肢DVT的诊断效能。4.对病例组和对照组的血浆标本进行凝血常规检查（APTT、PT、TT、FIB、AT-III和DD检测）,通过ROC曲线分析评估PC活性检测和凝血常规检查对于下肢DVT的临床诊断效能,比较上述指标单独测试与联合检测时的诊断效能。结果:1.经过系列浓度梯度试验筛选出了试剂盒的主要成分及浓度,其中R1中激活剂protac②的浓度为0.15 U/m L;R2中发色底物Pefachrome②PCa5297的浓度为1.5m M。将该试剂盒应用于XL-3200c全自动凝血分析仪,其反应参数为:加样比例为S:R1:R2=60μL（1:1）:100μL:100μL,孵育时间为10min,检测时间为5min。2.自建PC检测体系的批内、批间及日间不精密度均满足检测需求;空白限为0.71%,功能灵敏度为2.09%;线性范围为150.00%～20.00%（R2=0.9993≥0.99）;携带污染率为0.95%。该检测体系的试剂盒热稳定性好,37°C热破坏后可稳定至少14天,相对偏差均≤5%。在本实验室内初步建立的参考区间为79.00%～148.50%。3.自建PC检测体系与Siemens检测体系的检测结果呈高度相关（对照组R2=0.9771,DVT组R2=0.9776）。ROC曲线分析结果显示,自建PC检测体系的曲线下面积为0.888,高于Siemens检测体系。4.APTT、PT、TT、FIB、DD和PC的检测结果在病例组和对照组中的差异均具有统计学意义（P≤0.01）,ROC分析结合多元Logistic回归分析的结果显示,凝血常规联合PC活性检测的AUC要明显高于各项目单独检测以及凝血常规联合检测。结论:1.本研究建立了一种血浆PC活性的检测体系,该检测体系具有简单、快速、线性范围宽、高灵敏性的优点,适用于临床检测及血栓性疾病的研究。2.本研究证实了自建PC检测体系和市售检测体系的测定结果具有显著相关性和较高一致性,表明本检测体系的检测结果是可靠的。3.本研究探索了自建PC检测体系的临床应用价值,将其联合凝血常规检测应用于下肢DVT患者的诊断中能够有效地提高下肢DVT的诊断效能。
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