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目的：通过差异磷酸化蛋白质组学研究,筛选和鉴定出HCV/NS3质粒转染肝细胞后差异表达的酪氨酸磷酸化蛋白。方法：首先建立细胞系,将HCV/NS3质粒(pRcHCNS3-5’)和空白质粒(pRcCMV)分别转染入人源性肝细胞系QSG7701,通过G418筛选,构建稳定表达HCV/NS3蛋白的细胞系(QSG/NS3)和阴性对照组(QSG/CMV)。通过RT-PCR检测转染细胞HCV/NS3表达情况。然后进行蛋白质组学分析,分别抽提两组细胞的总蛋白,每组蛋白平行进行2次双向凝胶电泳,其中一块作为制备胶,另一块作为分析胶,分析胶中将蛋白质转移至PVDF膜后,与抗酪氨酸磷酸化抗体孵育,进行Western Blot分析,获得差异表达酪氨酸磷酸化蛋白质的反应图谱。将制备胶的电泳图谱和Western Blot的反应图谱进行比对分析,在制备胶上找到相应的差异酪氨酸磷酸化蛋白质点,经脱色、还原、酶解,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,获得肽质量指纹图(PMF),在Http://www.matrixscience.com/上搜索,匹配蛋白质,应用在线软件Netphos预测蛋白质酪氨酸磷酸化位点。结果：在QSG/NS3和QSG/CMV两组细胞系中,识别了13个差异表达的酪氨酸磷酸化蛋白质,其中鉴定了8个差异表达蛋白。4个蛋白质的酪氨酸磷酸化水平在QSG/NS3细胞系中表达上调,另4个蛋白质的酪氨酸磷酸化水平表达下调。软件预测每个蛋白质均存在酪氨酸磷酸化位点。结论：(1)鉴定出8个可能与HCV NS3致病相关的酪氨酸磷酸化蛋白质,为揭示HCV NS3致癌机制提供新的科学理论线索。(2)鉴定出的差异蛋白功能涉及细胞代谢、凋亡增殖及信号转导等方面。(3)应用在线软件分析预测蛋白质的酪氨酸磷酸化位点,鉴定出的8个蛋白均有至少一个酪氨酸磷酸化位点。