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黄颡鱼种类较多、分布广泛,我国从珠江到黑龙江等水域均有分布,是一种小型的经济淡水鱼类。雄性黄颡鱼具有筑巢产卵保护子代的习性,通过这种习性来保证自己和雌性黄颡鱼顺利地进行产卵受精以及自己后代的繁衍和生存。
利用磁珠富集法和放射性杂交相结合快速制备黄颡鱼微卫星。用限制性内切酶MboI对黄颡鱼完整基因组DNA酶切,蔗糖密度梯度离心收集400~900bp大小的片段,连接Brown接头并用生物素标记的(CA)16寡核苷酸探针与其杂交。杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,洗脱,PCR扩增,片段与pMD18-T载体相连,转入CaC12制备的感受态大肠杆菌,克隆,构建基因组文库。经同位γ-32P标记的寡核苷酸探针(CA)16二次杂交筛选,获得阳性克隆,选取适宜的微卫星序列来设计引物,共设计了100对引物。
为了获得更多有关遗传学方面的信息,并加强对其生殖繁衍方面的理解,进而阐明雄性黄颡鱼是否具有保护自己子代的行为和是否存在一夫多妻的交配体制。本研究选取了12窝黄颡鱼受精卵,利用10对微卫星标记对黄颡鱼的亲本和受精卵进行亲权鉴定和黄颡鱼子代的遗传多样性分析。
通过基因型x2检验表明12窝黄颡鱼子代在10个微卫星位点上都没有偏离Hardy-Weinberg平衡。在单亲鉴定中,累积非父排除概率为0.9986,平均父权相对机会(RCP)在99.989%~99.999%之间,每个子代在10个微卫星位点上的累积PI值在2006.73~604464.07之间。同时在鉴定分析中,发现少数窝里的卵子来自多个母亲,说明雄性黄颡鱼可以和几条雌性黄颡鱼发生交配。通过亲权鉴定的分析,可以确认看护受精卵的雄性黄颡鱼与受精卵间的亲子关系,并且证实了黄颡鱼存在着一夫多妻的交配体制。在遗传多样性分析中,黄颡鱼子代的平均等位基因数为11.7,无偏观测杂合度值(Ho)在0.2473~0.9866之间,无偏期望杂合度值(He)在0.7409~0.9080之间,多态信息含量(PIC)值0.7096~0.8993之间。