论文部分内容阅读
背景: 视网膜新生血管导致的视网膜的水肿、出血和脱离是多种视网膜疾病造成视力损伤的重要原因。新生血管的形成是由多种细胞因子介导的，机制并未明确。探索其可能的发病机制，寻找有效可行的治疗方法是目前眼科学领域研究的重点和热点。研究表明重组人血小板源性生长因子（recombinant humanplatelet derived growth factor-BB,rhPDGF-BB）在视网膜新生血管形成的过程中发挥作用，但其对视网膜血管内皮细胞（Human retinal microvascular endothelial cells,HRECs）的作用鲜有报道。 目的: 本研究通过体外培养HRECs，使用不同浓度的rhPDGF-BB进行干预，观察不同浓度rhPDGF-BB对HRECs增殖、迁移的影响，并进一步探讨其具体的作用机制，以期对视网膜新生血管的发病机制以及为临床探索新型治疗靶点提供有益的理论依据。 方法: 采用含体积分数10%FBS的DMEM培养液培养HRECs，分别将10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB加入对数生长期HRECs的培养液，未添加rhPDGF-BB者作为正常对照组。采用CCK8法检测各组细胞的增殖情况；采用划痕试验检测细胞相对迁移面积（迁移后无细胞区面积/划痕初期无细胞区面积）；采用逆转录-PCR法检测HRECs中PDGF-BB受体mRNA的相对表达量；采用实时荧光定量-PCR法检测HRECs中VEGF mRNA和integrin mRNA相对表达量。 结果: 培养的HRECs生长良好，用PDGF-BBR引物能扩增出与引物设计长度相符的表达条带。正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组培养细胞后24 h细胞增殖值（A）分别为1.01±0.05、1.09±0.04、1.10±0.02和1.13±0.05，10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组A值明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（t=2.504、3.430、3.483，均P<0.05)；划痕试验后24h，正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞相对迁移面积分别为（0.42±0.10） mm2、（0.38±0.09） mm2、（0.55±0.06） mm2和（0.61±0.05）mm2，划痕试验后48 h细胞相对迁移面积分别为（0.75±0.06）mm2、（0.81±0.02）mm2、（0.87±0.02）mm2和（0.98±0.02）mm2，总体比较差异均有统计学意义（F浓度=16.283，P=0.000；F时间=209.129，P=0.000），rhPDGF-BB作用后随着剂量增加和作用时间延长细胞相对迁移面积均明显增加，差异均有统计学意义（均P<0.05）；实时荧光定量PCR检测显示正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组 HRECs中integrin mRNA相对表达量分别为1.06±0.02、1.30±0.10、1.20±0.16、1.27±0.08,VEGF mRNA相对表达量分别为0.97±0.05、1.06±0.16、1.58±0.18、1.66±0.21，其中50和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞中integrin mRNA及VEGFmRNA相对表达量均明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（integrin mRNA：t=3.900、4.014，均P<0.05；VEGF mRNA：t=6.940、7.210，均P<0.05）。 结论: rhPDGF-BBR促进HRECs的增殖和迁移，其作用呈剂量和时间依赖性，其作用可能与上调VEGF和integrin在细胞中的表达有关。