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目的:肺癌是威胁人类健康的主要癌症之一,近年来发病率不断升高,这主要由于缺少早期筛查手段,以及有效治疗手段。白细胞介素7主要调节B细胞和T细胞成熟,此外它在肿瘤细胞中还发挥双重作用。IL-7在非小细胞肺癌中发挥促肿瘤细胞增值抗凋亡及促淋巴管生成作用,而在其他肿瘤中扮演抗肿瘤的角色。自噬会影响肿瘤细胞的物质代谢,与凋亡、上皮间质转化存在相互作用,还影响肿瘤细胞对放化疗药物的敏感性。因此,本文旨在探索IL-7对非小细胞肺癌自噬调控的机制。研究方法:1、用蛋白印迹(WB)的方法检测各组蛋白质表达的变化。按照细胞培养的规范方法培养A549细胞,用IL-7 24ng/ml处理A549细胞8小时,12小时,并与对照组做对比,采用核浆分离的蛋白抽提方法提取p53蛋白,用普通蛋白质抽提方法提取总蛋白和磷酸化蛋白,用WB的方法检测各实验组与对照组蛋白变化差异,用SPSS软件分析差异有否统计学意义。使用Anti-IL-7R抗体100ng/ml与IL-7 24ng/ml处理细胞12小时,观察阻断细胞的IL-7受体能否阻断IL-7产生的效应。接下来使用p53抑制剂PFT-α和AMPK抑制剂Compound C刺激A549细胞,观察信号通路上各关键分子的表达变化,借此验证IL-7调控的信号通路。2、使用quantitative Real-Time PCR法检测IL-7,PFT-α作用下p53的mRNA表达情况,用SPSS软件分析差异是否有统计学意义。3、采用透射电镜(TEM)的方法观察各实验组自噬泡的变化情况,验证IL-7对A549细胞自噬的影响。结果:1.在未处理的情况下,p53蛋白主要定位于A549细胞的细胞核内,有少量蛋白定位于细胞浆内,而IL-7作用12小时后,部分p53核蛋白向细胞浆转移,qRT-PCR结果显示IL-7作用后p53 mRNA升高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.从总蛋白上来看,IL-7作用会引起p-AMPK减少,p-mTOR升高。以上效应可以被A-IL-7R阻断。3.使用Compound C抑制AMPK后,观察到p-AMPK减少,p-mTOR增加,但无论是核蛋白p53还是浆蛋白p53都没有明显变化。4.使用PFT-α抑制p53后,观察到核与浆p53蛋白都减少,qRT-PCR结果也显示p53 mRN负反馈性增加,总蛋白检测结果显示p-AMPK表达增加,p-mTOR表达减少。5.电镜结果显示IL-7作用12小时后细胞自噬泡减少,A-IL-7R可以阻断IL-7自噬抑制的效应,PFT-α导致自噬增加,PFT-α+IL-7组自噬泡增加,Compound C引起自噬泡减少,Compund C+IL-7组自噬水平降低,以上各组都以空白对照组做参照。结论:1.IL-7可以介导p53从细胞核向细胞浆转移,并且这一效应可以被A-IL-7R所阻断。2.IL-7介导AMPK/mTOR通路的激活,AMPK是mTOR的上游调控分子,p53是AMPK和mTOR的上游调控分子。3.IL-7能抑制A549细胞的自噬,使用A-IL-7R可以阻断IL-7对细胞的影响,此外PFT-α诱导细胞自噬,Compound C抑制细胞自噬,说明IL-7通过诱导p53核浆转移,进而激活AMPK/mTOR通路而抑制自噬。