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目的：研制雌酮硫酸钠单克隆抗体，研究建立检测孕马尿中雌酮硫酸钠的简单，快速，方便的胶体金免疫层析试纸条的方法，为马产业后续的工作提供所收集的每一批尿液中结合雌激素的初步检测含量。方法：1.选择12只6~8周龄的BALB/c雌性小鼠进行免疫，研究了免疫方式、免疫剂量及免疫次数对免疫效价的影响。2.选择6只BALB/c雌性小鼠，以200/100μg/只，免疫四次。用ELISA法筛选血清效价高，高抗体敏感性的小鼠。3.在50%聚乙二醇1450(PEG)的作用下，将高效价小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合(脾细胞：骨髓瘤细胞=10:1)并接种于24h前准备的饲养层细胞培养板中，HAT培养液对融合细胞进行选择性培养，用ELISA法对杂交瘤细胞进行筛选、鉴定。4.采用辛酸-饱和硫酸铵法粗纯化腹水结合蛋白A亲和层析法纯化腹水，测定腹水抗体。5.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液。用所制胶体金溶液标记抗ESS单克隆抗体，建立胶体金免疫层析快速检测孕马尿中ESS的方法，并通过检测孕马尿中雌酮硫酸钠来确证它的特异性和灵敏度。结果：1.融合率达90.2%，ELISA筛选阳性率为4.4%，并筛得两株特异性和敏感性均较好的细胞株2C8和8A7扩大培养后制备腹水单抗。纯化后的腹水单抗2C8和8A7蛋白浓度分别为3.12mg/mL，3.57mg/mL。经ELISA法检测得2C8，8A7的腹水效价分别为1:1.02×10~5，1:2.05×10~5。竞争ELISA检测2C8和8A7两株腹水单抗的IC50值为12.5ng/mL。8A7单抗与ESS结构相似的雌激素进行交叉反应性检测，与马烯雌酮硫酸钠有一定的交叉反应，与其他雌激素无交叉反应。2.所制备胶体金溶液的胶体金粒径大小紫外扫描后计算判定是19.76nm；最适抗体标记量为8μg/mL，最佳标记pH为8.2。质控线羊抗小鼠IgG包被浓度为2mg/mL，每条1.5μL；检测线ESS-Mab的包被浓度为0.5mg/mL，每条1.5μL；检测ESS标准品灵敏度为50ng/mL；特异性比多克隆抗体胶体金试纸条提高。结论：本课题首先建立了动物免疫方法，并研制出抗雌酮硫酸钠单克隆抗体，初步建立了检测孕马尿中雌酮硫酸钠的简单快速，方便的胶体金ESS单克隆抗体免疫层析试纸条的方法。