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黏菌素(colistin)即多黏菌素E(polymyxin E),能有效治疗革兰氏阴性菌的感染,特别是对铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆有特效。然而由于黏菌素存在肾毒性和神经毒性,二十世纪80年代其使用仅限于耐药革兰氏阴性菌感染的纤维囊性肺炎的治疗。近10年内,由于多重耐药革兰氏阴性细菌的泛滥而新的有效的抗生素的开发速度跟不上细菌强大的求生变异能力,多黏菌素重新进入人们的视野,其临床应用价值再次得到认识和评价。然而,其神经毒性仍然是亟待解决的问题。国外学者的研究发现维生素C能够有效拮抗硫酸黏菌素所诱发的肾毒性,而维生素C对硫酸黏菌素所致神经毒性的作用尚不清楚。本实验以人鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)为对象,建立硫酸黏菌素神经损伤体外模型,观察维生素C对硫酸黏菌素诱导PC12细胞损伤的拮抗作用,并对其保护作用的可能机制进行初步探讨,以期减小硫酸黏菌素毒性,为硫酸黏菌素和维生素C在临床上的联合应用提供理论依据和实践基础。本实验首先分别以系列浓度硫酸黏菌素与PC12细胞作用不同时间,采用四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide, MTT)检测硫酸黏菌素对PC12细胞活力的影响,筛选最佳造模剂量和最佳造模时间。最终确定125μg·mL-1硫酸黏菌素孵育PC12细胞24h建立硫酸黏菌素体外神经损伤模型。然后分别向培养液中加入终浓度为0.1、1、10μmol·mL-1的维生素C继续培养24h后,于倒置显微镜下观察细胞的形态变化；采用MTT法检测细胞存活率；比色法测定细咆上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的活性、细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)和谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量ELISA法洲定细胞线粒体内细胞色素C (Cyt-c)的释放程度和细胞DNA片段化程度：实时荧光定量PCR法分析凋亡基因caspase-9和caspase-3mRNA的表达情况。实验结果表明：1.倒置显微镜观察结果显示,随着保护组维生素C浓度增加,细胞的生长状态不断趋向正常对照组的细胞,细胞贴壁性好,折光性增强,细胞胞体饱满,梭状和菱形细胞数增多。2.MTT法检测结果显示,1μmol·mL-1和10μmol·mL-1维生素C能够显著提高细胞活力。3.细胞上清液中LDH含量的测定结果显示,维生素C能够削弱硫酸黏菌素对细胞膜的损伤,降低细胞中LDH漏出。4.维生素C能降低硫酸黏菌素损伤PC12细胞内ROS含量,提高GSH水平,增强SOD活性,增强细胞抗氧化能力。5.维生素C抑制Cyt-c释放,降低DNA片段化程度,下调凋亡基因caspase-9和caspase-3mRNA的表达,并且对这些指标的影响具有一定的剂量依赖性趋势。综上所述,维生素C可以维持硫酸黏菌素损伤PC12细胞的正常形态,提高细胞活力,降低硫酸黏菌素对PC12细胞膜的损伤,降低硫酸黏菌素造成的氧化应激,使由线粒体途径介导的细胞凋亡得到抑制。表明维生素C能够有效保护PC12细胞,拮抗硫酸黏菌素诱发的神经毒性。