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过氧化物酶(Peroxidase, POD. EC1.11.1.x)是一类重要的氧化还原酶,它能有效催化一系列有机物和无机物发生化学反应。植物POD(EC1.11.1.7)不仅具有重要的生理作用,而且广泛应用于生物技术领域。本论文主要研究芥蓝POD的性质、同工酶的分离纯化及芥蓝过氧化物酶Bj-APX在大肠杆菌BL21中的表达。以愈创木酚为底物,芥蓝POD最适反应温度为55°C,最适pH为5.6,并且有较好的耐热性。1g/L海藻糖、1g/L氯化钙、1g/L硫酸镁和1g/L的明胶能够提高芥蓝POD的稳定性,其中氯化钙和明胶的效果明显,与对照相比活性分别提高了25%和23%。对芥蓝幼苗和成熟叶POD同工酶谱分析表明在幼苗中有4种同工酶,而成熟叶中有6种,用乙烯利(ETH)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-糠氨基嘌呤(KT)、和1-萘乙酸(NAA)处理幼苗发现同工酶酶谱条带数没有变化。EHT、2,4-D和NAA处理可以提高POD活性;KT处理POD活性没有明显改变。采用硫酸铵沉淀、阴离子交换以及凝胶电泳分离鉴定,纯化了两种同工酶,Bj1和Bj4,SDS-PAGE显示其分子量分别为66.2 KDa和32 KDa。以数据库中发表的与芥蓝同属植物的POD基因保守序列出发,设计引物,以芥蓝cDNA为模板进行PCR扩增,结果得到两条长度约为1200 bp与500 bp的DNA条带,测序结果表明它们分别与青花菜和拟南芥的基质过氧化物酶基因SAPX和APX高度同源,进一步采用3’与5’-RACE得到全长序列的Bj-SAPX与Bj-APX,数据库比对结果显示,它们与同属的Brassica oleracea BO-sAPX和Brassica oleracea BO-APX1的相似性分别为98%与99%。将Bj-APX基因克隆到表达载体pET28a中,转入大肠杆菌BL21后进行诱导表达,分别考察了诱导温度、诱导时间、诱导物IPTG浓度对重组蛋白表达的影响,确定最适诱导条件为30°C诱导4h,IPTG浓度为0.05mM。SDS-PAGE分析显示,重组蛋白大小约为29 KDa。外源添加血红素、氯化钙和丙酮可提高重组蛋白中血红素的含量和POD活性,其中CaCl2的最适浓度为3 g/L,丙酮为7.5%。