血管内皮生长因子促进骨折愈合的实验研究

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目的;制作胫骨骨折克氏钢针内固定术后的动物模型,实验组动物腹腔注射小鼠VEGF(血管内皮生长因子),对照组动物仅作骨折模型,于术后不同时段取胫骨进行X线摄片;并于术后不同时段切取骨折断端,进行组织学观察,以及统计学分析,对比研究VEGF对动物骨折愈合的作用,探讨应用VEGF对骨折愈合所产生的影响。方法;42只健康雄性小白鼠,随机分2组,每组21只。右侧下肢膝关节处纵向剪开皮肤,在胫骨髁间处0.7毫米注射器针头钻孔,沿髓腔方向插入直径约为0.35毫米、长度约为1.2cm的无菌克氏钢针,在胫骨中上1/3处钝性剥离肌肉筋膜,横向折断胫骨,缝合切口。实验组(VEGF组)腹腔注射小鼠VEGF,每次5ng,每天两次,共两周;对照组仅作骨折模型,不作任何处理。骨折后分别于手术后1、2、3周3个时相点每组分批各处死7只动物,取出右胫骨后两组动物分别进行X线摄片,动态对比观察骨痂的生长和骨折的愈合情况;手术取出克氏钢针后,右胫骨矢状轴方向系列切片HE染色组织学观察新生毛细血管、骨小梁、软骨细胞、成骨细胞、骨痂等细胞组织学形态变化以及根据断端软骨细胞骨化率进行统计学分析,对比研究两组动物的骨折愈合情况。结果;1、x线观察,实验组动物3周时骨折端均有明显骨性骨痂,局部增粗,骨密度较高,骨折线消失,骨折愈合。对照组动物3周时有1只骨折端有连续性骨痂通过,5R有骨痂通过,但骨折线仍可见,有1只无骨痂生长。2、组织学观察,实验组动物3周时,骨折处内外骨痂改建、塑建进一步完善,破骨细胞活跃,骨小梁形成骨性骨痂连接断端并骨髓腔形成,骨折线消失,骨折被修复。对照组动物3周时,骨折处有1只可见纤维性骨痂中骨小梁形成骨性骨痂连接,4只可见骨痂出现,但骨折线清晰,2只断端无愈合现象。3、统计学分析,两组动物在术后第一周,断端软骨细胞骨化率差异无统计学意义(P>0.05),在术后第二、三周,骨折断端软骨细胞骨化率差异有统计学意义(P<0.01)。结论;本实验证明了小鼠VEGF能通过促进小鼠胫骨骨折端及周围软组织血管的生成、增加骨折端血流量,促进内皮细胞的增殖、调节破骨细胞活性,并参与软骨的成熟和吸收,促进软骨内成骨与成骨细胞相互作用,诱导骨形成,促进骨愈合。意义;VEGF在骨骼修复中起着十分重要的作用已得到广泛共识。虽然各国学者对VEGF应用于骨折治疗进行了大量研究,并不断取得突破性进展,但VEGF安全有效地应用于临床还需要进一步研究。随着对VEGF研究及骨折愈合机制认识的深人,分子生物学及基因技术的完善与发展,骨科领域诸如骨折、骨缺损、异体骨移植修复过程的爬行替代时间都可望因VEGF的商业应用而得以缩短,VEGF的深人研究必将为这类疾病的治疗开辟广阔的前景。
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