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目的：探讨Toll样受体4（TLR4）与缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在胰腺癌组织表达及相关性。方法：应用免疫组化法检测84例胰腺癌组织中TLR4和HIF-1α蛋白的表达情况，分析两者表达的相关性，探讨其与临床病理特征间的关系；同时在体外，采用低氧箱培养和氯化钴（CoCl2）化学缺氧法模拟肿瘤细胞缺氧环境，应用RT-PCR、免疫荧光法和流式细胞法分别检测测不同缺氧时间胰腺癌Panc-1细胞TLR4的表达，探讨缺氧对胰腺癌细胞TLR4表达的影响。结果：免疫组化结果显示84例胰腺癌组织中TLR4与HIF-1α蛋白阳性表达率分别为76%和79%。对同一组织标本连续性切片观察发现TLR4与HIF-1α蛋白表达的区域分布有呈明显重叠，进而采用Spearman双变量相关性分析显示胰腺癌组织中TLR4与HIF-1α蛋白表达水平呈高度正相关（r=0.623，P<0.001）。体外细胞实验显示胰腺癌Panc-1细胞TLR4mRNA的表达水平随着缺氧（1％O2或CoCl2培养）时间延长而不断增加，TLR4蛋白的表达在低氧环境处理12小时后明显上调（P<0.05）。结论：TLR4和HIF-1α在胰腺癌组织和细胞中均有不同程度的表达，并且二者表达呈高度正相关。目的：本部分研究将进一步探讨缺氧微环境下转录因子HIF-1α对胰腺癌细胞中TLR4基因表达调控作用。方法：构建靶向沉默HIF-1α siRNA干扰质粒和HIF-1α过表达真核表达质粒，通过脂质体转染法转染至人胰腺癌Panc-1细胞株。低氧箱培养或CoCl2化学低氧法模拟肿瘤缺氧环境。通过采用实时定量PCR和Western blot法验证Panc-1细胞中HIF-1α基因的表达情况；采用实时定量PCR及流式细胞法检测TLR4基因的表达。结果：成功构建HIF-1α-siRNA干扰质粒和HA-HIF-1alpha-pcDNA3表达质粒。经实时定量PCR和Western blot实验证实低氧环境下HIF-1α过表达组Panc-1细胞HIF-1α mRNA和蛋白表达水平明显上调，同时TLR4基因的表达也明显上调；而siRNA转染组HIF-1α和TLR4基因的表达显著下调。结论：低氧微环境下Panc-1细胞中HIF-1α的表达对TLR4基因的表达具有调控作用。目的：探讨质粒shRNA阻断HIF-1α对裸鼠胰腺癌移植瘤生长抑制作用及对TLR4表达的影响。方法：将沉默HIF-1α shRNA干扰质粒和对照control-shRNA真核表达质粒通过脂质体转染法稳转至人胰腺癌Panc-1细胞株。然后分别注射到随机分配的8周大雄性裸鼠背部建立裸鼠移植瘤模型(n=12)，2周后开始测量肿瘤的近似体积，每周2次，8周后处死裸鼠，剥离肿瘤组织，称瘤重，计算抑瘤率，实验期间测量肿瘤的最大纵径及最大横径，计算肿瘤的近似体积，绘制生长曲线。采用免疫组化法测定各组裸鼠移植瘤TLR4蛋白的表达水平。结果：HIF-1α shRNA组的裸鼠移植瘤在肿瘤生长30天后，肿瘤体积就开始小于control-shRNA组，差异有统计学意义(P<0.05)。8周后，HIF-1α shRNA组肿瘤体积(125.06±14.12mm3)与瘤重(0.189±0.025g)明显小于对照组(2125.06±89.56mm3)与瘤重(2.89±0.27g)(P<0.01)。HIF-1α shRNA组肿瘤抑瘤率为94.2％。免疫组化结果显示，HIF-1α shRNA组TLR4蛋白表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。结论：阻断HIF-1α对裸鼠胰腺癌移植瘤生长产生明显的抑制作用，并且抑制移植瘤中的TLR4表达。