【摘 要】
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VPAC2受体是垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,它与能量代谢和免疫调节密切相关。本实验已通过基因工程方法,构建VPAC2受体的特异激动剂RMBAY。本研究在此基础上,目的在于提高RMBAY体外稳定性
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VPAC2受体是垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,它与能量代谢和免疫调节密切相关。本实验已通过基因工程方法,构建VPAC2受体的特异激动剂RMBAY。本研究在此基础上,目的在于提高RMBAY体外稳定性。 本研究利用基因工程原理和技术,模仿已有的VPAC2受体特异激动剂序列,结合蛋白内含肽介导的多肽制备工艺,设计并实现作为VPAC2受体的特异激动剂的重组多肽RMBAY的高效制备。 利用蛋白内含肽介导多肽纯化系统制备多肽产生多肽C端巯酯的中间产物,多肽C端巯酯极不稳定,易于水解,本研究利用不同pH的缓冲液及添加不同硫醇(NaHS或MESNA)的缓冲液对多肽巯酯进行透析,通过SDS-PAGE和激光飞行质谱检测巯酯定向水解的情况。实验结果显示,碱性条件下(pH为9.0)及添加硫醇均可促进巯酯定向水解生成硫代羧酸。通过比较NaHS和MESNA对多肽稳定性的影响发现,50mM MESNA能有效提高多肽的稳定性,对RMBAY具有保护作用。 对RMBAY的降糖活性结果表明,RMBAY具有显著降糖作用,不仅有效促进葡萄糖依赖的胰岛素分泌,而且提高机体的糖耐受能力。 建立小鼠被动皮肤过敏反应(PCA)的动物模型,开展重组多肽RMBAY对皮肤过敏作用的动物实验。结果显示:PACAP衍生多肽RMBAY(5nmol/kg)对小鼠被动皮肤过敏反应有一定的抑制作用(0.01<P<0.05)。 对RMBAY的制备、纯化方法及其稳定性的研究,以及RMBAY具有的降糖活性和抗皮肤过敏的生物活性的研究,为VPAC2受体特异激动剂的重组多肽RMBAY的进一步研究和开发奠定基础。
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