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血虚证是体内阴血亏损的病理现象,由失血过多,脾胃失常或久病大病等所致。中医理论提出缺血、气虚及气血双虚等均可引发血虚证,其中血虚临床主要表现为红细胞、血红蛋白减少,常见疾病有缺血性贫血、失血性贫血等;气虚临床主要表现为白细胞减少,免疫力下降等,常见疾病有营养不良性贫血、再生障碍性贫血等;气血双虚兼备上述两者的症状。血虚证适宜用中药加以调理和治疗,其中当归补血汤(Danggui Buxue Tang,DBT)是常用的复方。DBT为经典的补血益气名方,由黄芪和当归5:1组成,对血虚证具有良好的临床效果。每种血虚证的病因和症状各有差异,但是关于DBT对每种血虚证的对症效果,还未见有相关研究。因此,本论文将构建符合血虚型、气虚型及气血双虚型血虚证的三种对应模型,研究DBT对不同血虚模型的对症关系和治疗效果,为科学使用当归补血汤提供理论依据。 第一,建立缺血型血虚证模型,研究观察当归补血汤的对症关系和治疗效果。对正常小鼠连续梯度皮下注射乙酰苯肼(1-Acetyl-2-phenylhydrazine,APH)建立缺血型血虚证模型,结果显示小鼠红细胞含量减少37%,白细胞变化不明显,血清促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)含量增加1.26倍,肾脏EPO含量增加1.18倍,脾脏促红细胞生成素受体(Erythropoietin receptor,EPOR)含量增加1.52倍,肾脏EPO mRNA表达增加3.47倍,脾脏EPOR mRNA表达增加1.67倍,各指标剧烈变化的分界浓度是40mg/kg。模型小鼠体内红细胞含量降低,EPO、EPOR含量增加符合缺血型血虚证的症状,表明建模成功。对缺血型血虚小鼠连续14天灌服DBT,结果表明模型小鼠灌服DBT第7天后,中各指标基本恢复至正常小鼠的水平;而未灌服DBT的则需要14天才能恢复正常。这些结果说明了APH仅破坏了小鼠体内的红细胞含量,机体组织损害小,APH建立的缺血型血虚模型可在一定时间内自身修复,DBT的使用可显著加快其修复速度。 第二,建立气虚型血虚证模型,研究观察当归补血汤的对症关系和治疗效果。利用连续梯度腹腔注射环磷酰胺(Cytoxan,CTX)建立气虚型血虚证模型,结果显示小鼠白细胞降低52%,血清EPO降低53%,肾脏EPO降低55%,脾脏EPOR降低4,4%,肾脏EPO mRNA表达降低43%,脾脏EPOR mRNA先增后恢复正常,各指标剧烈变化的分界浓度是40mg/kg。CTX使模型小鼠体内红细胞和血红蛋白有所降低,而白细胞降幅尤其明显,免疫能力下降,符合气虚型血虚模型的症状,表明建模成功。对气虚型血虚小鼠连续灌服DBT14天,结果显示未灌服DBT的小鼠死亡率达到了60%;灌服DBT14天后小鼠的死亡率下为零,但是机体内各指标均未得到明显缓解。这些结果说明CTX能强烈降低小鼠的免疫能力,对小鼠机体组织损害较大,所建立的气虚型血虚证属于较难修复的血虚模型。DBT修复结果说明DBT对免疫低下型的病症具有良好的治疗作用,可以大大缓解此类血虚小鼠组织受损虚弱情况。 第三,建立气血双虚血虚证模型,研究观察当归补血汤的对症关系和治疗效果。利用APH和CTX的混合注射建立气血双虚血虚证模型,结果显示小鼠红细胞降低44%;白细胞降低42%;血红蛋白降低17%。血清EPO增加1.17倍;肾脏EPO增加1.61倍;脾脏EPOR增加1.34倍。肾脏EPO mRNA表达增加9.64倍,脾脏EPOR mRNA表达增加6.35倍,小鼠未发生死亡现象。模型小鼠的红细胞、白细胞、血红蛋白均有明显下降,EPO和EPOR均增加,符合气血双虚型血虚模型的症状,表明建模成功。对气血双虚型血虚小鼠连续灌服DBT14天,结果显示灌服DBT的小鼠在第7天和第14天的各指标均明显好于同时期对照小鼠。这些结果说明两种药物的组合对模型小鼠机体组织损害较小,所建立的气血双虚型血虚模型死伤率低,血虚状态持久,可以充分研究DBT药效学机理。DBT对气血双虚型血虚模型的治疗效果显著,尤其是当归补血汤灌服量是25g生药/kg时疗效最好。 本研究成功建立了三种模型,分别符合三种血虚症的特点,模型对应性好、治疗反应迅速。建模成功后,通过DBT灌服后观测血虚模型各项指标的变化,确定了DBT的对症效果,发现DBT对缺血型血虚模型修复时间最短,效果最好;对气虚型血虚模型修复时间较长,但可显著降低模型小鼠的死亡率;而对气血双虚型血虚模型修复效果和时间介于前两者之间。最后通过建模与灌服DBT的同步实验,排除小鼠自身修复力的干扰,发现DBT的最佳灌服量为25g生药/kg,修复效果最佳。