裂殖酵母SAGA各亚基亚细胞荧光定位分析

来源 :复旦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jonathanwu
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SAGA(Spt-Ada-Gcn5 Acetyltransferase complex)是一个多亚基保守的转录复合物,在裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)里由19个亚基组成,调控体内10%基因的转录。为了进一步研究SAGA,本研究在Hayashi和Matsuyama等的基础上,获得了SAGA所有亚基的原位整合荧光菌株,并且完整地分析了SAGA所有亚基的亚细胞荧光定位。荧光数据显示这些亚基的定位可分为4种类型,分别是完全定位于核内型,核内少量胞质大量型,核内大量胞质少量型以及特殊定位型,这提示SAGA亚基除共同参与转录调控之外,可能还有其他功能。  SAGA亚基Sgf73是联系去泛素化模块与SAGA其他模块的桥梁,它的缺失不仅明显减少了去泛素化亚基Ubp8、Sgf11、Sus1核内的定位,同时也影响了乙酰化亚基Gcn5、Sgf29、Ngg1以及核心结构亚基Spt7在细胞核内的定位,这提示Sgf73对维持SAGA的酶学功能和稳定性至关重要;但是,其余亚基的荧光定位在缺失之后并没有明显变化,说明尽管这些亚基共同处于一个复合物内,但彼此之间的联系并不一致。另外,本研究在检测荧光的同时发现sgf73+的缺失还造成了胞质分裂的缺陷,导致细胞出现多核多膈膜表型。为了初步探究造成这种缺陷原因,本研究在△sgf73里过量表达膈膜降解途径中的关键基因ace2+和mid2+。回补结果表明,ace2+不能回补sgf73+缺失造成的缺陷,而mid2+也仅能部分回补,提示尽管sg73+影响了mid2+的表达或部分功能,但由于mid2+无法完全回补△sgf73所表现出的缺陷,因此sgf73+扩可能还同时影响了其他基因的表达或功能,从而影响了胞质分裂。
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