附子含量测定、现代炮制工艺和液质联用分析研究

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附子(Aconiti Lateralis Radix Praeparata)是我国著名的常用有毒中药,为毛莨科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx的子根的加工品。主产于四川江油、安县、布托,陕西汉中,云南大理等地,四川江油为道地产区。附子味辛、甘,大热,有毒,归心、脾、肾经,始载于《神农本草经》,被誉为“回阳救逆第一品药”,具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛等功效。主要用于阳衰欲脱、身凉肢冷、脉微欲绝、阳痿、宫冷、心腹冷痛、虚寒吐泻、阴含水肿、阳虚外感、寒湿痹痛等症。现代药理研究表明,附子具有强心、抗炎、抗肿瘤、抗衰老、镇静、镇痛、提高免疫力等作用,临床用于救治急性心肌梗塞所致的休克、低血压、冠心病及心绞痛等。附子化学成分复杂,建立多指标毒/效成分的含量测定方法和科学准确认识化学成分,对其质量控制和临床用药等尤为重要。附子传统炮制工艺繁琐,方法复杂,可控性差,有效成分损失严重,工业生产和临床用药迫切需要探寻新的炮制工艺,改进炮制方法。针对上述问题,本文进行了以下研究:(1)附子含量测定相关研究附子水溶性成分的含量测定方法研究:本文首次建立了HPLC-DAD法同时测定附子中盐酸多巴胺、去甲猪毛菜碱、尿嘧啶、尿苷、鸟苷的含量的方法。附子酯型生物碱含量测定方法的优化:《中国药典》(2010年版)一部附子、川乌质量标准项下测定酯型生物碱含量的供试品溶液的制备方法欠妥,本文采用酸水超声提取制备供试品溶液,酯型生物碱的含量比药典制备方法高约15-40%。附子提取液稳定性研究:探索生附子提取液加热过程中酯型生物碱的稳定性及其变化规律,研究表明附子酯型生物碱酸性条件下较稳定,碱性条件下不稳定。(2)附子现代炮制工艺研究《中国药典》(2010年版)附子沿用胆巴的炮制方法,该炮制工艺繁琐,方法复杂,可控性差,有效成分损失严重,总生物碱成分损失达80%以上,存在炮制过度之嫌。本文采用干热高温烘制和湿热高压蒸制的现代加工方法炮制附子,研究探讨干热高温和湿热高压对附子中6种酯型生物碱含量的影响,结果表明本文方法可使剧毒性双酯型生物碱含量显著降低,同时避免了胆巴炮制附子有效成分的流失,且炮制工序简便可行,质量可控,适合于工业化大生产,为附子加工炮制提供新的参考方法。(3)附子液质联用分析研究附子化学成分的HPLC-Q-TOF-MS分析:本文采用HPLC-Q-TOF-MS,对附子化学成分进行较全面的分析,共鉴定了36个化合物,为附子化学成分研究提供更进一步的参考。附子煎煮过程中化学成分变化的HPLC-MS分析:本文探究生附子煎煮过程中25个含量较高的主要成分的变化规律,结果表明在煎煮过程中,双酯型生物碱一直降低,约2h左右含量几乎检测不到;单酯型生物碱先逐渐升高,6-8h含量达到最高,后逐渐降低;醇胺型生物碱一直逐渐升高;其他生物碱先逐渐升高,6-8h含量达到最高,后略微降低,几乎趋于平衡。
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