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瑞香素(Daphnetin)是从瑞香属植物长白瑞香中提取出来的有生物活性成分的试剂,别名祖师麻甲素,是我国首创新药,化学名称为7,8-二羟基香豆素(7,8-dithydroxycoumarin)。在很早以前就有报道表明,通过灌胃或腹腔注射瑞香素,都可以明显抑制蛋清性及右旋糖酐性足跖肿胀,其抑制作用的效果与水杨酸相似；还有很多学者研究了含瑞香素为主要活性成分的祖师麻注射液的抗炎效果,证实祖师麻注射液对大鼠急性渗出性炎症具有非常明显的抑制作用,效果和相同剂量氢化可的松相似,甚至略强；还有国外学者研究了17种瑞香属植物的提取物在体外对炎症因子IL-1, TNF-α表达的抑制作用,发现瑞香素对炎症细胞因子的表达具有很明显的抑制作用；一些研究表明,瑞香素还具有抗血小板聚集、抑制PMN呼吸暴发和氧化溶血的作用效果,而且还具有抑制5-酯氧化酶和环氧化酶活性作用。国内外学者研究还发现,瑞香素具有抑制蛋白激酶和明显的抗菌作用,而且对免疫功能也有影响,研究表明瑞香素可能通过抑制白三烯和前列腺素的合成而产生抗炎及抗变态反应的作用。最近的研究已证明,瑞香素能高效抑制和阻断佐剂诱导的关节炎和自身免疫性关节炎的病程发展,也证明了瑞香素在治疗关节炎的过程中是主要的有效活性成分。因此,瑞香素是一种源自中草药的活性单体化合物,其药理作用非常广泛。目前,它已经用于治疗各种类型的关节炎、血栓闭塞性脉管炎及冠心病等疾病。但能否抑制急性胰腺炎的炎症扩散,改善胰腺损伤,目前还没有相关报道。为了探讨瑞香素对重症急性胰腺炎的作用效果和机制,本课题拟从以下两个部分进行研究。首先观察和评估瑞香素对重症急性胰腺炎的作用效果,然后再深入研究和探讨瑞香素的抗炎分子机制,为急性胰腺炎的治疗提供理论依据。第一部分瑞香素对牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎的保护作用目的：重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis, SAP)是胰腺的急性、严重的炎症病变,早期的主要变化是胰腺腺胞细胞的水肿、坏死、出血、微循环障碍等等。一般起病急剧,病情凶险,并发症多,死亡率高。在多种凝血功能障碍的动物模型的临床前研究证实,瑞香素能够减轻组织器官的损伤,而且有很强的抗炎活性。本研究的目的是为了观察和评估瑞香素对大鼠重症急性胰腺炎的保护作用和效果。方法：用5%牛磺胆酸钠1ml/kg经胆胰管逆行注射来建立大鼠重症急性胰腺炎模型。实验分为四组,第一组为假手术组(SO组),第二组为假手术后给予瑞香素组(SO-D组),第三组为重症急性胰腺炎模型组(SAP组),第四组为造模后给予瑞香素组(SAP-D组)。在造模前30分钟,给予大鼠腹腔内注射瑞香素(4mg/kg)。造模完成后分别在3h,6h,12h三个时间点处死大鼠,采用心脏穿刺的方法收集血清,检测血清淀粉酶和脂肪酶水平,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α),和白细胞介素-1β (IL-1β)的水平；切取胰腺组织检测MPO的活性和MDA的含量,对胰腺组织进行固定染色后观察病理损伤情况,并结合胰腺的组织病理学评分来评估胰腺炎的严重程度。结果：瑞香素治疗的重症急性胰腺炎组大鼠(SAP-D组),胰腺的组织病理学评分较重症急性胰腺炎组(SAP组)大鼠明显减轻(p<0.05)；注射牛磺胆酸钠以后,在3h、6h、12h三个时间点分别检测大鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平,血清促炎性细胞因子TNF-a和IL-1β水平,以及胰腺组织MPO活性和MDA含量等,结果显示,SAP-D组均较SAP组明显降低(p<0.05)。结论：瑞香素具有较强的抗炎活性,它可以减轻牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎的严重程度,能够抑制促炎细胞因子TNF-a和IL-1β的分泌,对大鼠重症急性胰腺炎具有明显的保护作用。第二部分瑞香素对牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎保护机制的研究目的：瑞香素是源自中草药的活性成分,它是从金边瑞香中提取的香豆素类化合物,其药理作用非常广泛,已有报道证实其具有镇痛和抗炎的作用。现在研究较多的是关于关节炎方面的抗炎作用。但瑞香素具体的抗炎机制目前还不清楚,本研究的目的是进一步探讨瑞香素在牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎中的抗炎分子机制。方法：雄性Wistar大鼠腹腔内注射瑞香素(4mg/kg)进行预处理,30分钟后用5%的牛磺胆酸钠(1ml/kg)胆胰管逆行注射。实验分为假手术组(SO组),假手术后用瑞香素处置组(SO-D组),模型组(SAP组)和造模后用瑞香素干预组(SAP-D组)。假手术或造模后12h处死所有动物。收集大鼠血液和胰腺组织。检测胰腺组织中髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量；用免疫组化方法检测中性粒细胞的浸润分布情况；用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α),白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素-lβ (IL-1β)的水平；用Western blot方法检测核因子кBa (IкBα)磷酸化水平和Toll样受体4(TLR4)的表达情况；用电泳迁移率实验(EMSA)检测核因子kappa B (NF-кB)的DNA结合能力。结果：瑞香素显著改善了胰腺炎的组织病理学变化(p<0.05)；明显降低了髓过氧化物酶(MPO)的活性和丙二醛(MDA)的含量(p<0.05)；减少了中性粒细胞的浸润；下调了促炎细胞因子TNF-a, IL-1β和IL-6的水平(p<0.05)；降低了核因子кBα (IкBa)的磷酸化和Toll样受体4(TLR4)的表达(p<0.05),并且抑制了核因子kappa B (NF-кB)的DNA结合能力(p<0.05)。结论：研究结果表明,瑞香素对用牛磺胆酸盐钠诱导的重症急性胰腺炎的保护作用机制可能是由于其抑制了胰腺组织TLR4的表达,抑制了IкBα的磷酸化,从而导致NF-кB活性降低,使胰腺组织中促炎细胞因子表达减少。即瑞香素可能是通过抑制TLR4介导的NF-кB信号通路的激活而对急性胰腺炎发挥保护作用的。这些发现表明,瑞香素可能会成为预防和治疗重症急性胰腺炎的潜在的重要药剂。