论文部分内容阅读
目的：①应用高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound，HIFU）辐照肿瘤细胞获取肿瘤抗原并致敏树突状细胞（dendritic cell，DC），制备DC肿瘤疫苗。观察此方法制备的DC瘤苗免疫小鼠后机体产生的抗肿瘤主动免疫保护作用。②为应用DC介导的肿瘤免疫预防和治疗开辟新途径。③为HIFU开辟新的应用领域。
方法：①应用10ng/ml的粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）和10ng/ml的白介素-4（interleukin-4，IL-4）联合诱导培养小鼠骨髓细胞，光镜和电镜观察DC发育过程中形态学变化；流式细胞术检测DC表面分子CD80、CD86、H-2K及I-A的表达情况。②应用不同剂量的HIFU辐照体外培养的CT-26肿瘤细胞后，用胎盼兰染色测定活细胞数、观察细胞的形态学变化；MTI法分析HIFU剂量与肿瘤细胞存活率的关系，从而找出制备肿瘤抗原的工作剂量。③用剂量为1000W/cm<2>×30s的HIFU辐照体外培养的BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞，获取肿瘤抗原，与体外培养扩增第5天的DC共孵育，制备DC瘤苗。④DC瘤苗的体内主动免疫保护作用：HIFU辐照法制备的：DC瘤苗（HIFU组）一次性免疫正常BALB/c小鼠（5×10<5>/只，含250μl RPMI1640），7天后再皮下接种对数生长期的CT-26结肠癌细胞（5×10<5>/只），然后观察肿瘤发生时间、20天时肿瘤重量和肿瘤体积及小鼠生存时间、生存率等。并与反复冻融法制备的DC瘤苗（冻融组）和等量RPMI1640（阴性对照组）进行比较。
结果：①用GM-CSF和IL-4联合培养小鼠骨髓细胞3天后，可见细胞形态发生改变，细胞形态不规则，并呈簇生长。培养第6～8天，细胞表面出现较多毛刺样突起，拉长，为典型的DC特征。流式细胞仪检测，DC高表达CD80、CD86、H-2K及I-A等。②应用不同剂量的HIFU辐照CT-26细胞，随着剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少，肿瘤细胞的碎片逐渐增多。超声剂量为1000W/cm<2>×30s时，细胞全部死亡，失去细胞形态并全部被撕裂成碎片。因此，选用1000W/cm<2>×30s作为制备肿瘤细胞裂解液（肿瘤细胞抗原）的工作剂量。③HIFU组、冻融组分别与阴性对照组比较肿瘤发生时间、20天肿瘤重量、体积等差异均有显著性意义（P＜0.01或P＜0.05）；HIFU组与冻融组比较，肿瘤重量及体积差异亦均有显著性意义（P＜0.05）；HIFU组、冻融组分别和阴性对照组小鼠生存时间中位数分别是32.5天、28.5天和24.5天，三组之间生存率比较，x<2>=22.35，P＜0.01，差异具有显著性意义。说明HIFU辐照法和反复冻融法制备的DC瘤苗都能抵抗肿瘤的生长，具有主动免疫保护作用，而且前者有优于后者的趋势。
结论：①联合应用GM-CSF和IL-4培养小鼠骨髓细胞，可大量扩增成熟DC，培养的DC符合其自身的特性。②HIFU能灭活肿瘤细胞且能破碎肿瘤细胞，1000W/cm<2>×30s可作为制备肿瘤细胞裂解液（肿瘤细胞抗原）的工作剂量。此方法获取的肿瘤全细胞抗原可有效地致敏DC，制备DC瘤苗。③HIFU辐照法制备的DC瘤苗可以使机体产生抗肿瘤的主动免疫作用，有效抵抗肿瘤的攻击，具有明显的肿瘤预防作用。