论文部分内容阅读
目的研究叉头框蛋白FOXJ2在乳腺癌中的表达情况,初步探讨FOXJ2对乳腺癌上皮间质转化及乳腺癌转移的调控机制及意义。方法1.在组织水平,选取110例腋窝淋巴结转移状况不同的乳腺癌石蜡切片标本,采用免疫组织化学方法检测FOXJ2和E-cadherin的表达情况,其中组织学分级Ⅰ级(15例)、Ⅱ级(50例)、Ⅲ级(45例)；腋窝淋巴结转移状况NO(31例)、N1(47例)、N2(32例)。SPSS15.0统计软件分析数据。2.在细胞水平,采用Western Blot和RT-PCR方法检测正常乳腺细胞HBL-100细胞及乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435、 MDA-MB-453和MCF-7细胞中FOXJ2的表达情况,并构建FOXJ2的过表达质粒(N3-EGFP-FOXJ2)和干扰质粒(shRNAs)分别转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞,利用Western Blot、 RT-PCR和免疫细胞荧光技术检测转染后EMT标志物E-cadherin和vimentin的表达情况,RT-PCR检测EMT诱导蛋白SNAIL、SLUG、 FOXC2、TWIST1的表达情况,同时构建划痕实验和transwell迁移实验模型观察乳腺癌细胞转移行为的变化。结果1.组织水平,免疫组织化学结果显示,在乳腺癌组织中,FOXJ2的表达随腋窝淋巴结转移增多而降低。结合临床资料分析显示,FOXJ2表达与肿瘤大小、ER、腋窝淋巴结转移状况差异有统计学意义(P<0.05),而与乳腺癌患者的性别、年龄、组织学分级、PR和HER-2差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman等级相关分析显示：FOXJ2与E-cadherin表达呈正相关(P<0.05)。2.细胞水平,Western Blot显示FOXJ2在迁移性弱的MCF-7细胞中表达较高,而在迁移性强的MDA-MB-231细胞和MDA-MB-435细胞中表达较低：其表达与上皮细胞标志物E-cadherin表达趋势相同,与间质细胞标志物vimentin表达趋势相反。将FOXJ2过表达质粒转染MDA-MB-231细胞,E-cadherin表达升高,vimentin、N-cadher in表达降低,同时MDA-MB-231细胞的迁移能力明显受到抑制;而EMT的诱导蛋白SNAIL、SLUG、FOXC2和TWIST1的mRNA水平没有明显的变化。在MCF-7细胞中转染了FOXJ2的干扰质粒后细胞的迁移能力增强。结论1.乳腺癌组织中FOXJ2表达与腋窝淋巴结转移状况呈负相关,与E-cadherin水平呈正相关,提示FOXJ2可能通过调节EMT的发生从而调节乳腺癌的转移。2.细胞水平发现FOXJ2能够使EMT标志物E-cadherin表达上调,vimentin、N-cadherin表达下条,并且使细胞的迁移能力降低,表明FOXJ2可能具有抑制乳腺癌细胞迁移和EMT启动的能力。因而,FOXJ2有望成为乳腺癌转移的临床监测指标及治疗靶点。