新孢子虫病(Neosporiasis)和弓形虫病(Toxoplasmosis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)和刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的一种寄生于多种哺乳动物有核细胞内的繁殖障碍性原虫病,可导致妊娠母畜流产、弱胎、木乃伊胎、神经性疾病等。目前针对该类原虫病的防治还没有有效的疫苗和特效药物,防治的关键在于早发现、鉴别诊断和采取综合防控措施。因此,本文旨在对新孢子虫NcSRS2的重组抗原蛋白作为靶抗原的试验研究,一方面对该类原虫病导致的“母畜流产症”等可进行快速监测和诊断,另一方面为新孢子虫新型疫苗的研制及开发提供前期技术支持。(1)本试验以新孢子虫NcSRS2重组质粒、菌种重组抗原及阳性标准血清等为研究材料,优化表达、纯化方法,将实验室累计保存的质粒、菌种进行活化、优化和标准化,探究新孢子虫NcSRS2表面靶抗原的临床应用特性、菌株的活力和保存期。结果显示,2009~2012年期间保存的菌种已失活;保存的重组蛋白已发生降解,而2013~2015年期间保存的菌种仍具有较好的活力,通过复苏、活化后可继续进行保菌和后续试验;保存的重组蛋白仍保留其免疫原性和反应原性;菌株与30%的甘油按相应比例保存在-20℃的最佳时间为2年;要妥善保存有活性的不同批次的抗原、质粒、菌种等,避免浪费、防止蛋白的降解和丢失,以此确保科研的连续性。(2)运用课题组前期建立的新孢子虫病rELISA抗体检测方法和建立的弓形虫病的rELISA检测方法,对来自南北疆13个县市的3592份马、奶牛、牦牛、黑头羊、绒山羊样品进行了血清学检测。结果显示草食家畜新孢子虫的平均阳性率为14.1%(95%CI:13.0~15.3),弓形虫的平均阳性率为13.5%(95%CI:12.4~14.6),混合感染率为0.6%(95%CI:0.3~0.9)。对不同年龄段的调查结果显示1~3岁的草食家畜较易感,说明新孢子虫病和弓形虫病在我区草食家畜中普遍存在感染,是导致母畜流产的主要原因之一。本文对马感染新孢子虫和弓形虫情况的报道属首次。(3)本试验利用具有免疫活性的NcSAG1蛋白、NcSRS2蛋白及两种联合蛋白分别与弗氏佐剂1:1的比例混匀后制备三种重组抗原免疫小鼠,运用间接ELISA的方法检测小鼠抗新孢子虫抗体水平和血清细胞因子IL-4和IFN-γ变化。结果表明:免疫后的小鼠IgG、IgG2a和IFN-γ抗体表达水平均升高,说明NcSRS2重组蛋白苗可激发机体产生Th1型免疫反应;IgG1抗体和IL-4表达水平升高,说明NcSRS2重组蛋白苗还可激发机体产生Th2型免疫反应;抗体水平在二免时极显著于佐剂组和对照组(P<0.01),且NcSRS2重组蛋白苗免疫增强效果均显著于NcSAG1重组蛋白苗和联合免疫组(P<0.05)。