白芍总苷(Total glucosides of paeony,TGP)广泛的药理研究发现,白芍总苷不仅有抗炎的作用,对急性化学性、免疫性肝损伤也有一定的防治作用。其机制与其抗自由基、提高抗氧化物酶的活性和免疫调节、抑制肝损伤大鼠体外的枯否细胞促肝星状细胞增生等有关。本课题采用HPLC的方法,研究了白芍总苷在急性CCl4肝损伤大鼠体内的药代动力学参数和血浆蛋白结合率,并与正常大鼠进行了比较,且比较了不同的药物浓度对动力学参数和蛋白结合率的影响;采用大鼠在体胃肠吸收的方法,对不同浓度的白芍总苷在体胃肠吸收进行了研究比较;利用血清指纹图谱的方法初步推测了药效物质基础。具体研究内容如下:第一部分白芍总苷在急性CCl4肝损伤大鼠体内的动力学研究目的:研究白芍总苷在急性CCl4肝损伤大鼠体内药物动力学过程,考察药物浓度对其动力学参数的影响,并比较与正常大鼠的差异,为临床合理用药提供参考。方法:大鼠灌胃给予白芍总苷,采用HPLC的方法,测定不同时间点的芍药苷和芍药内酯苷的血药浓度。结果:白芍总苷给药后,芍药苷和芍药内酯苷在模型组大鼠体内,高、中、低剂量芍药苷和芍药内酯苷的t1/2分别为300.97、271.37、294.46 min;313.34、302.33、302.76 min。Ke(×10-3)分别为2.35、2.62、2.52 mL/min;2.24、2.40、2.34 mL/min。三个浓度芍药苷和芍药内酯苷的Cmax分别为22.54、14.52、5.49μg/mL; 9.02、5.04、2.34μg/mL。AUC0-t分别为8792.9、5048.3、1897.2μg·min/mL;3393.7、1930.6、809.0μg·min/mL。Tmax均为2 h。在正常大鼠体内,高、中、低剂量芍药苷和芍药内酯苷的t1/2分别为236.85、221.10、237.10 min;224.12、238.77、227.71 min。Ke(×10-3)分别为3.07、3.26、3.28 mL/min;3.13、2.92、3.12 mL/min。三个浓度芍药苷和芍药内酯苷的Cmax分别为19.16、11.60、4.46μg/mL ;7.16、4.00、1.93μg/mL。AUC0-t分别为6975.6、4064.1、1500.6μg·min/mL;2701.9、1635.4、635.1μg·min/mL。Tmax为2.5 h。结论:模型组与正常组相比较,模型组的Cmax、AUC0-t显著增大, t1/2延长,Tmax明显缩短。模型组和正常组的Tmax和t1/2不受白芍总苷剂量影响,但Cmax和AUC0-t随着剂量增大而增大成线性关系。第二部分白芍总苷在急性CCl4肝损伤大鼠血浆中的蛋白结合率研究目的:体外研究芍总苷在急性CCl4肝损伤大鼠血浆中的蛋白结合率,并与正常大鼠血浆蛋白结合率进行比较。方法:采用平衡透析法结合HPLC法,分别对白芍总苷中的芍药苷和芍药内酯苷与CCl4肝损伤大鼠血浆以及正常大鼠血浆的蛋白结合率进行测定。并采用SPSS11.5统计软件处理,进行组内高、中、低浓度及组间的比较。结果:白芍总苷血浆浓度在50、100和200μg/mL时,白芍总苷中的芍药内酯苷和芍药苷在肝损伤大鼠血浆中的蛋白结合率分别为(12.4±1.5)%,(13.2±1.6)%,(20.2±2.1)%;(15.5±0.4)%,(16.5±1.4)%,(27.9±1.6)%。在正常大鼠血浆中的蛋白结合率分别为(8.1±0.9)%,(9.7±2.3)%,(14.7±1.4)%;(12.7±1.6)%,(13.5±0.8)%,(15.6±0.2)%。结论:白芍总苷体外与肝损伤大鼠血浆中蛋白的结合属低度结合,且与血浆浓度可能有一定的依赖性;同时模型组的血浆蛋白结合率高于正常组的血浆蛋白结合率。第三部分白芍总苷的胃肠吸收动力学研究目的:研究白芍总苷中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠胃肠道中的吸收动力学特征。方法:采用在体大鼠胃肠吸收的实验方法及HPLC法,以芍药苷和芍药内酯苷为考察指标,检测浓度的变化,计算不同浓度的白芍总苷在胃和小肠的吸收参数。结果:质量浓度1、2、4 mg/mL的白芍总苷受试液进行2 h的胃吸收实验,3种浓度的芍药苷和芍药内酯苷吸收量分别为(45.22±7.81),(86.41±13.67),(153.77±12.38)μg/h;(18.04±2.89),(34.95±4.08),(61.36±9.11)μg/h。芍药苷质量浓度为40、80、120 mg/mL的白芍总苷肠循环液在小肠内回流2 h,低、中、高浓度的芍药苷和芍药内酯苷在小肠的Ka值无显著差异。白芍总苷以相同浓度在不同肠段回流2 h,芍药苷的Ka值在十二指肠与结肠、回肠有显著差异,空肠与回肠、结肠有显著差异;芍药内酯苷的Ka值在十二指肠、空肠与回肠、结肠有显著差异。结论:白芍总苷在胃和肠内均有吸收,但在十二指肠的吸收量最大。在胃和小肠内的吸收量与药物浓度成线性关系,不同浓度的吸收速率常数无明显差异,因此推测白芍总苷在体内可能为被动扩散机制。第四部分白芍总苷血清指纹图谱的初步研究目的:研究白芍总苷在不同时间的血清色谱指纹图谱,为研究其药效物质基础奠定基础。方法:采用高效液相的方法,分析比较了空白血清,白芍总苷溶液和15 min、1 h、3 h、6 h的含药血清,确定白芍总苷在血中的移行成分。结果:含药血清中测得芍药苷和芍药内酯苷,并随着时间的变化浓度表现出消长变化,且在3小时峰面积最大。结论:获得了白芍总苷不同时间点血清的HPLC色谱指纹图谱,芍药苷和芍药内酯苷入血移行,初步推测芍药苷和芍药内酯苷可能是白芍总苷主要的药效物质基础。综上所述,研究结果发现急性CCl4肝损伤模型组的Cmax、AUC0-t较正常组显著增大,t1/2延长,Tmax明显缩短。各组的Tmax和t1/2不受白芍总苷剂量影响,但Cmax和AUC0-t随着剂量增大而增大成线性关系;白芍总苷体外与肝损伤大鼠血浆中蛋白的结合属低度结合,且与血浆浓度可能有一定的依赖性,同时模型组的血浆蛋白结合率高于正常组的血浆蛋白结合率;白芍总苷在胃和肠内均有吸收,且吸收量与药物浓度成线性关系,不同浓度的吸收速率常数无明显差异,推测白芍总苷在体内可能为被动扩散机制;初步推测芍药苷和芍药内酯苷可能是白芍总苷主要的药效物质基础。