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目的：探讨吉非替尼是否可诱导肺腺癌PC9细胞发生继发性耐药,以及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)启动子甲基化在耐药过程中的作用,拟为肺腺癌耐药提供新的治疗靶点。方法：本研究体外培养肺腺癌吉非替尼敏感细胞株PC9,应用不同浓度吉非替尼进行干预。MTT法检测PC9细胞株对吉非替尼的敏感性。亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法检测肺腺癌PC9细胞株EGFR启动子甲基化水平。再使用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dc)对吉非替尼耐药细胞株PC9/GR细胞株进行干预。MTT法检测耐药株PC9/GR对吉非替尼敏感性的变化。结果：经过从0.01μM逐渐提升吉非替尼诱导浓度至3μM之后,MTT结果显示耐药细胞株PC9/GR细胞株IC50(3.95±0.23μM)较之前敏感株PC9(0.01±0.002μM)明显升高(P<0.05),BSP结果显示发生异常甲基化的位点结果比较：PC9/GR甲基化水平74%较之前59%明显升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示PC9/GR细胞株较PC9细胞株EGFR mRNA表达量升高(P<0.05)。使用5-Aza-dc处理PC9/GR细胞后,PC9/GR细胞株IC50(2.55±0.14μM)较之对照组(3.87±0.034μM)降低(P<0.05)结论：1.吉非替尼逐步提升浓度体外诱导法可诱导PC9细胞株对其产生耐药,成功构建PC9/GR耐药细胞株。2.PC9细胞EGFR启动子甲基化异常可能参与了吉非替尼继发性耐药机制。