病毒病是危害作物安全生产的重要病害。马铃薯Y病毒（potato virus Y,PVY）可侵染马铃薯、烟草等茄科作物,其N株系侵染普通烟会产生叶脉坏死症状,严重影响烟草生产、烟叶品质;番茄褐色皱果病毒（tomato brown rugose fruit virus,To BRFV）侵染番茄引起果实坏死,严重影响番茄产量和品质。目前生产上的主栽烟草品种不抗PVY,也没有对To BRFV有很好抗性的番茄品种,在缺少有效抗病毒药剂的情况下,交叉保护是防治植物病毒病的良好选择。本文基于PVY-GZ和To BRFV-SD全长c DNA侵染性克隆,利用定点突变技术获得了一系列弱毒突变体,评估了弱毒突变体的交叉保护效果,获得了有田间应用潜力的弱毒突变体。主要结果如下:1、证明CP参与PVY引起的烟草叶脉坏死,获得了含有两个或三个位点突变、对野生型PVY有良好保护效果的弱毒突变体。利用PVY-GZ全长c DNA侵染性克隆,构建了7个单位点突变体。接种珊西烟发现,与野生型一样,突变体HC（K50E）和HC（K124R）仍在珊西烟上表现叶脉坏死,但突变体HC（K124L）、HC（K182R）和CP（D6N）在珊西烟上不引起烟草叶脉坏死症状,而突变体HC（N166A）和CP（G9R）丧失侵染力。聚合叶脉坏死能力丧失的突变位点,获得了双位点突变体HC（K124L＿K182R）、HC（K124L）-CP（D6N）、HC（K182R）-CP（D6N）和三位点突变体HC（K124L＿K182R）-CP（D6N）。接种珊西烟发现,与野生型相比,以上四个突变体在珊西烟上均不引起烟草叶脉坏死症状,病毒CP的蛋白积累量和RNA积累量分别下降了50%、53%、40%、57%和98%、99%、60%、98%。将这四个弱毒突变体保护接种珊西烟15天后挑战接种,与未进行保护接种的珊西烟相比,弱毒突变体保护接种的珊西烟不表现叶脉坏死症状并且症状减轻,检测不到野生型病毒GFP的蛋白积累,相对防治效果分别是63%、54%、22%和63%。2、证明复制酶Y697和D711突变后影响To BRFV的致病力,弱毒突变体Y697A对野生型To BRFV有良好的交叉保护效果。利用To BRFV-SD全长c DNA侵染性克隆,构建了14个单位点突变体,其中Y697A、D711A接种本氏烟后不表现任何症状。将弱毒突变体Y697A和D711A保护接种本氏烟15天后挑战接种,与未进行保护接种的本氏烟相比,弱毒突变体Y697A保护接种的本氏烟无明显症状,并且野生型病毒GFP的蛋白积累量和RNA积累量分别降低了79%和99.9%。保护接种15天后挑战接种,弱毒突变体Y697A在番茄品种齐达利和上海惠合405上的相对防治效果分别为43%和32%。本研究筛选获得了有良好交叉保护作用效果的PVY和To BRFV弱毒突变体,对指导PVY和To BRFV的田间防治具有积极作用。