论文部分内容阅读
蓝玉簪龙胆为龙胆科龙胆属植物蓝玉簪龙胆(Gentiana veitchiorum Hemsl.)的干燥地上部分。藏语学名为“邦见温保”,据据“晶珠本草”记载蓝玉簪龙胆归肝、胆经;性寒、味苦;具清热解毒功效;现代药理研究表明蓝玉簪龙胆可减轻肝肺部的炎症,保护肝肺功能,抑制肝肺纤维化的形成。已报道的蓝玉簪龙胆的化学成分包括:为环烯醚萜苷类、裂环烯醚萜类及黄酮等化学成分。为了从蓝玉簪龙胆植物资源中获得多类型、新结构、高活性的化合物,充分开发利用其药用资源,本论文对蓝玉簪龙胆乙醇提取物进行了化学成分含量分析、分离和结构鉴定,并对分离得到的单体化合物的抗菌活性进行了初步的研究。HPLC方法定性定量分析蓝玉簪龙胆中的环烯醚萜类成分,獐牙菜苦苷、獐牙菜苷和龙胆苦苷在0.0567~0.9756mg?mL-1范围内线性关系良好,回收率97.88~100.4%,RSD1.43~1.95%;3种环烯醚萜苷在蓝玉簪龙胆各部位的含量存在明显差异,可为其质量标准的制定提供科学数据。通过高速逆流色谱法(HSCCC)从蓝玉簪龙胆中分离制备得到三个高纯度化合物。选择乙酸乙酯-正丁醇-水(4:0.5:5,v/v/v)为二相溶剂系统,上下两相分别作为固定相、流动相,主机转速设置为900 r/min,流动相溶剂流速为2 mL/min,紫外检测波长为254nm,柱温为20℃。利用高速逆流色谱可以在260 min内可一步纯化150 mg藏药材蓝玉簪龙胆水粗提物中的龙胆苦苷,异荭草素,异牡荆苷,三者完全分离,纯度分别达到98.2%,94.5%,96.0%。利用UHPLC-QTOF-MS/MS分析手段,对蓝玉簪龙胆90%甲醇提取物进行研究,分析得到18个化合物,包括5个环烯醚萜苷类、4个有机酸类和9个黄酮类化合物,分别为Isotachioside(1),Tachioside(2),5-(β-D-glucopyranosyl)-2-hydroxybenzoic acid(3),6′-O-β-D-glucosyl-loganic acid(4),Loganic acid(5),6′-O-β-D-glucosyl-gentiopicroside(6),2-O-glucosyl-hexanoic acid(7)Swertiamarin(8),Isovitexin 4′-O-diglucoside(9),Gentiopicroside(10),Sweroside(11)Isosaponarin(12),Isoorientin 4′-O-glycoside(13),Isoorientin 4′-diglucoside(14),Isovitexin7-O-diglucoside(15),Lutonarin(16),Isoorientin(17),Isovitexin(18)。利用硅胶、葡聚糖凝胶及高效制备液相色谱等方法,对蓝玉簪龙胆50%乙醇提取物进行分离纯化,得到7个化合物。结合MS、UV、IR、1DNMR和2D NMR等波谱分析及化学方法,鉴定其结构分别为(5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖基-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、异荭草素(2)、异牡荆苷(3)、异金雀花素(4)、、龙胆苦苷(7)。其中,化合物1为新化合物,命名为异荭草素-4′-二葡萄糖苷(isoorientin-4′-diglucoside);异荭草素-4′-O-葡萄糖苷(5)和异皂草苷(6)为首次从该植物中分离得到。然后,利用滤纸片法,以大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、核桃腐霉病菌、黄曲霉为靶标菌,对6个黄酮碳苷类化合物(1-6)进行测定,结果发现6个化合物对靶标菌均无抗菌活性。