【目的】肠道真菌群落是人类肠道功能器官的重要组成部分,对于调节肠道健康状态发挥重要作用。肝脏与肠道之间存在着密切的解剖及生理学关系,肝脏的功能直接影响肠道功能。本研究从分子水平研究不同乙肝状态下肠道真菌菌群的分子生态结构变化,揭示乙肝患者肠道中真菌菌群的多样性,以及不同乙肝状态下肠道真菌的定性、定量关系,明确真菌菌群结构变化与乙肝发展历程的相关性,探索肠道真菌菌群失衡与肠道内源性感染及肝病重症化的关系,为进一步研究影响肝病进程的关键作用机制,寻找干预和阻断肝病重症化发展过程的措施奠定实验基础。【方法】1.以乙肝肝硬化患者、慢性乙型肝炎患者、HBV携带者、和健康志愿者作为研究对象,采用QIAamp(?)DNA粪便试剂盒-玻璃珠击打法分别抽提各组研究对象的粪便总DNA,真菌18S rDNA通用引物进行PCR扩增,扩增产物进行18S rRNA基因克隆,构建真菌18S rDNA克隆文库,利用限制性片段长度多态性(RFLP)技术筛选阳性克隆子并进行序列分析,利用MEGA4.0等软件构建系统发育树,分析各组研究对象肠道真菌菌群的多样性和结构特征。2.建立一种准确、可靠的监测肠道真菌的实时荧光定量PCR方法,设计真菌的种特异性引物,对肠道白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、酿酒酵母等常见真菌进行核酸定量分析,比较和分析各组之间各菌种的定量关系。【结果】1.四组研究对象所有阳性克隆子经过酶切分析和测序,共获得27个操作分类单元(OTUs),归属于3个真菌类群:接合菌纲(3.7%),子囊菌纲(81.5%)和担子菌纲(14.8%),其中检出最多的真菌菌属是念珠菌属(占克隆子总数44.7%)、酵母菌属(占克隆子总数14.0%)和未培养真菌(占克隆子总数16.8%)。三组不同乙肝状态患者肠道中念珠菌属和酵母菌属分布比例高于健康人,而未培养真菌低于健康人。乙肝肝硬化患者组、慢性乙型肝炎患者组、HBV携带者组和健康志愿者组的肠道真菌菌落分别存在有18、17、12、13个OTUs,乙肝肝硬化患者组、慢性乙型肝炎患者组肠道真菌菌群多样性较高。2.不同乙肝状态患者肠道常见真菌数量发生改变,除了近平滑念珠菌之外,其他几种常见肠道真菌数量在乙肝肝硬化患者组、慢乙肝患者组、乙肝携带者组、健康组之间都存在显著性差异。其中,乙肝肝硬化患者组白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、酿酒酵母都比健康志愿者组显著增多(P＜0.05);慢性乙型肝炎患者组白色念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、酿酒酵母比健康志愿者组显著增多(P＜0.05)。【结论】1.人类肠道中存在较为丰富的真菌类群,不同乙肝状态患者肠道真菌菌群多样性发生改变,乙肝肝硬化患者组、慢性乙型肝炎患者组肠道真菌菌群多样性较强,其优势真菌菌属为念珠菌属和酵母菌属,提示肠道真菌菌群结构改变与乙肝发展历程相关。2.实时荧光定量PCR技术可以准确、快速的对人类肠道真菌菌种进行核酸定量分析,可以为预防肝病患者发生条件致病性真菌感染提供新的检测和监测手段。3.不同乙肝状态患者肠道真菌菌群生态平衡发生改变,乙肝肝硬化和慢乙肝患者肠道白色念珠菌、克柔念珠菌、酿酒酵母等常见真菌量显著增多,提示肠道真菌菌群失衡与乙肝重症化存在一定的相关性。