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目的:制备纯化的威灵仙总皂苷,体外作用于急性早幼粒细胞白血病NB4细胞,研究威灵仙总皂苷对NB4细胞的作用机制,为临床用药提供理论依据。
方法:①运用大孔吸附树脂对威灵仙提取液进行分离纯化,得到威灵仙总皂苷,并对其含量进行检测。②设置多个浓度梯度的威灵仙总皂苷药物组,观察用药后不同时间点的NB4活细胞数,计算生长抑制率;Wrights-Giemsa染色计数法和NBT还原试验测定细胞分化率,透射电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术检测CD11b/CD33表达情况,Annexin V法测定细胞凋亡率。
结果:⑴使用大孔树脂法纯化威灵仙总皂苷,精密性试验和重现性试验的RSD分别为0.85%和1.35%:威灵仙总皂苷主要富集于70%乙醇洗脱液部分,总皂苷含量达23.14±0.12%,其回收率达到4.55%,其RSD为0.89%。⑵威灵仙总皂苷对NB4细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量-效应依赖关系;在本实验条件下,威灵仙总皂苷对NB4细胞无明显的诱导分化作用,但成熟粒细胞比例随浓度增高有所升高:能显著诱导NB4细胞凋亡,诱导凋亡率与时间具有依赖性,在25μg/ml-100μg/ml范围内具有浓度依赖性。
结论:①使用大孔吸附树脂可以有效提纯威灵仙浸液中的有效成分总皂苷;②威灵仙总皂苷可有效抑制NB4细胞增殖,诱导其发生凋亡,但具有统计学意义的诱导分化现象不明显。