目的:本研究从乌拉尔甘草、阿魏和苦豆子中筛选出拮抗棉花枯萎病菌的内生菌,初步分离拮抗菌A的抑菌物质,探究抑菌机理,并研究拮抗菌对棉花生长的影响。方法:拮抗菌的分离和筛选采用平板培养法,生长曲线、最适p H、糖发酵、淀粉水解试验及革兰氏染色对拮抗菌的基本性质进行了研究;通过16Sr DNA序列比对建立系统进化树。超声波破碎细胞,离心分离胞内、胞外分泌物,硫酸铵沉淀透析法分离胞内抑菌粗蛋白,考马斯亮蓝G-250法检测蛋白浓度,Sephadex G-75柱层析初步纯化抑菌蛋白,SDS-PAGE法测定抑菌蛋白分子量大小。抑菌物质对棉花枯萎病菌菌丝生长、产分生孢子和分生孢子萌发的影响分别采用平板培养法、显微计数法、凹玻片培养法。检测了拮抗菌A处理棉花种子后,其萌发率和成株率的变化,以及棉苗在不同生长时期的POD、PPO、PAL活性。结果:1、本研究从乌拉尔甘草、阿魏和苦豆子中分离并筛选得到了4株对棉花枯萎病菌具有拮抗性的内生菌,其中拮抗菌A抑菌效果最好,初筛抑菌圈直径达26.96mm。经过鉴定,拮抗菌A、B、C、D分别属于Bacillus amyloliquefaciens、Bacillus tequilensis、Bacillus sp.、Klebsiella pneumoniae。2、拮抗菌A的胞内分泌物对棉花枯萎病菌菌丝生长、产分生孢子和分生分生孢子萌发的抑制率均大于胞外分泌物。其中对棉花枯萎病菌产分生孢子的抑制效果最好,平均抑制率为40.14%,对数生长期的拮抗菌对产分生孢子的抑制率最大,为88.81%。3、浓度为80%的硫酸铵沉淀出的蛋白对棉花枯萎病菌的抑制率最大(19.55%)。分离的粗蛋白保持抑菌活性的最高耐受温度为60℃,最高耐受p H为8,最低耐受p H为4。4、抑菌粗蛋白经过Sephadex G-75柱层析分离,在200-400s之间收集的洗脱液对棉花枯萎病菌产分生孢子的抑制率达34.79%,均大于其对菌丝生长和分生孢子萌发的抑制率。初步分离得到的抑菌蛋白分子量在25 k Da-100 k Da之间。5、拮抗菌A处理棉花种子后可提高其成株率。棉花苗期不同生长时期的POD、PPO、PAL酶活性测定结果表明,接种棉花枯萎病菌后,用拮抗菌A处理过的棉花植株在播种40d后PAL酶活性显著增加;此外,同一生长时期、不同处理的棉苗3种酶活性均无显著差异。结论:本研究从乌拉尔甘草、阿魏和苦豆子中分离并筛选得到了4株对棉花枯萎病菌抑制作用较好的内生菌,初步探究了拮抗菌A的抑菌机理;拮抗菌A抑菌物质产生于对数生长期,胞内分泌物抑菌效果较好,主要抑制途径为抑制棉花枯萎病菌产分生孢子;抑菌粗蛋白对温度和p H的稳定性均可以满足生产实践的需要;初步纯化的抑菌蛋白的分子量在25 k Da-100 k Da之间,且仍保持一定的抑菌活性;拮抗菌A处理棉花种子后可提高其成株率,但棉花幼苗的活性氧酶系统无明显增强。