阿特拉津免疫检测方法的研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:exampleyuyu10
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本论文对除草剂阿特拉津残留的直接竞争酶联免疫检测方法(ELISA)和胶体金免疫层析试纸条检测法进行了系统的研究。成功制备了半抗原,采用活化酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA).卵清白蛋白(OVA)和辣根过氧化物酶(HRP)偶联制备免疫原、包被抗原和酶标抗原,免疫原免疫大耳白兔以后,成功获得了特异性抗阿特拉津的多克隆抗体。建立了阿特拉津直接竞争ELISA方法,方法的半抑制浓度IC50为0.12ngmL-1,方法的最低检出限(LOD,以IC15计算)为0.01ngmL-1。11种结构类似的三嗪类除草剂中,抗体与扑灭津(96.53%)、扑草净(76.57%)和莠灭津(28.02%)的交叉反应较大,与其他除草剂的交叉反应率均小于20%。选择纯净水、自来水、井水、海河水、土壤和玉米作为样品进行了阿特拉津的添加回收实验,阿特拉津的回收率在76.5-108.1%之间,板内变异系数为3.2-8.2%,板间变异系数为5.2-9.6%,该检测结果与高效液相色谱分析法(HPLC)的检测结果有很好的相关性,两种方法检测结果的线性回归方程为y=1.004x-0.049,相关系数r2为0.991。以上结果表明本研究建立的ELISA方法具有很高的准确度和精确度,适用于快速检测水、土壤和玉米样品中阿特拉津的残留,并且可以实现大量样品的同时检测。同时,以胶体金作为抗体标记物,建立了免疫层析试纸条快速检测方法,该方法的检出限定义为使试纸条检测线(T线)的条带颜色与质控线(C线)相比产生明显区别的阿特拉津的最小浓度,为2ng mL-1,检测时间为7-10min。选择纯净水、自来水、井水、海河水、土壤和玉米作为样品进行了加标检测,加标后的水样不需要任何处理直接用于试纸条检测,对水样的检出限为2ng mL-1;土壤和玉米样品经过简单的前处理后检测,对土壤和玉米样品的检出限为40μg kg-1,并且该方法的检测结果与ELISA方法的一致。该方法具有灵敏度高、检测快速、成本低等优点,适用于水、土壤和玉米样品中阿特拉津农药残留的现场快速筛选。
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