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白介素10(Interleukin-10,IL-10)是一种多功能的细胞因子,同时具有免疫增强和免疫抑制作用,但其主要作用是免疫抑制。有些病毒在感染宿主时,通过上调宿主IL-10的表达或编码IL-10类似物,即病毒IL-10(Viral interleukin-10,vIL-10),逃避宿主的免疫监视和清除,以建立持续性感染。鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus3,CyHV-3)是目前已知能编码vIL-10的少数低等脊椎动物病毒之一。本论文对CyHV-3 vIL-10基因进行了克隆表达,随后用获得的重组vIL-10(Recombinant viral interleukin-10,rvIL-10)蛋白刺激鲤鱼头肾巨噬细胞和鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprini,EPC),利用荧光定量PCR、Tunel染色和流式细胞术,检测免疫相关因子的表达、凋亡相关因子的表达和细胞凋亡率,探讨CyHV-3 vIL-10对免疫相关因子表达的影响和对EPC细胞凋亡的影响。生物信息学分析结果显示,CyHV-3 vIL-10由179个氨基酸组成,含有一个名为IL-10 superfamily的保守结构域,且含有信号肽,但不含跨膜区;CyHV-3 vIL-10含有1个潜在的磷酸化位点和2个潜在的N-糖基化位点;CyHV-3 vIL-10的二级结构仅由α-螺旋和无规卷曲组成;CyHV-3 vIL-10与人IL-10、鱼类IL-10或其他vIL-10s具有较低的氨基酸序列相似性和同源性,但具有非常相似的三级结构。通过原核表达获得大小约为38 kDa的rvIL-10蛋白。为了研究rvIL-10蛋白对免疫相关因子表达的影响,本实验用rvIL-10蛋白刺激鲤鱼头肾巨噬细胞,通过荧光定量PCR检测免疫相关因子的表达。结果显示,rvIL-10蛋白单独刺激鲤鱼头肾巨噬细胞后,rvIL-10蛋白不能显著影响白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子α1(Tumor necrosis factor alpha 1,TNF-α1)、干扰素γ1(Interferon-gama1,IFN-γ1)、CXC趋化因子a(CXC chemokine a,CXCa)、诱导型一氧化氮合成酶(Induced nitric oxide synthase,iNOS)、白介素12(Interleukin-12,IL-12)、IL-10、主要组织相容性复合体Ⅰ(Major histocompatibility complex I,MHC I)、白介素8(Interleukin-8,IL-8)和白介素6(Interleukin-6,IL-6)基因的表达,但10μg/mL rvIL-10蛋白能显著促进IL-10基因的表达;rvIL-10蛋白和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)共同刺激鲤鱼头肾巨噬细胞后,rvIL-10蛋白能抑制LPS诱导的IL-1β、TNF-α1、iNOS、CXCa、IL-12和MHCⅠ基因的表达,其中对TNF-α1和iNOS基因表达的抑制差异性显著,而rvIL-10蛋白不能影响LPS诱导的IL-10、IL-8和IL-6基因的表达,但rvIL-10蛋白对IFN-γ1基因表达的调节是双重的,0.1μg/mL rvIL-10蛋白能显著抑制LPS诱导的IFN-γ1基因的表达,10μg/mL rvIL-10蛋白却能显著促进LPS诱导的IFN-γ1基因的表达。为了研究rvIL-10蛋白对EPC细胞凋亡的拮抗作用,本实验用LPS刺激预先用rvIL-10蛋白孵育后的EPC细胞,通过Tunel染色、流式细胞术和荧光定量PCR检测细胞凋亡率和凋亡相关因子的表达。结果显示,rvIL-10蛋白预处理EPC细胞后,凋亡阳性细胞数减少,凋亡率显著下降;rvIL-10蛋白能抑制LPS诱导的Bax、caspase-9和caspase-3基因的表达,显著促进LPS诱导的Bcl-2基因的表达,但不影响Apaf-1基因的表达。本实验成功克隆表达了CyHV-3 vIL-10基因,获得纯化的rvIL-10蛋白,并证实CyHV-3 vIL-10能抑制LPS诱导的炎性因子的表达,能拮抗EPC细胞的凋亡,为研究CyHV-3逃避宿主的免疫监视提供了理论和实验基础。