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骨骼肌在动物体内分布广泛,是主要的代谢组织之一,对骨骼肌的代谢调控是动物在不同的生理条件下实现自我调控的关键。仔猪的早期断奶引起的早期断奶应激及其营养调控都是影响现代养猪生产效益的关键因素,且仔猪的早期断奶应激改变骨骼肌的蛋白质代谢及日粮亮氨酸调节仔猪骨骼肌能量代谢的机制尚不清楚。比较蛋白质组学技术对蛋白质组高通量、高效率的筛选与定量,可为从整体水平解析早期断奶应激及亮氨酸对仔猪骨骼肌重要代谢相关信号通路的影响规律提供技术支持。因此,本研究进行了如下试验:试验一利用iTRAQ技术分别对0h(对照组)和24h(处理组)断奶处理后仔猪的骨骼肌样品进行差异显著蛋白质的筛选与定量,并进行后续的生物信息学分析与验证,得出如下结果:1.利用iTRAQ技术成功筛选到44个受早期断奶应激影响的仔猪骨骼肌差异显著蛋白质,同时利用IPA软件及GO、KEGG数据库成功绘制出这些差异显著蛋白质的蛋白互作网络。2.早期断奶应激抑制仔猪骨骼肌中蛋白质的合成,通路分析的结果显示蛋白质合成相关的EIF2和mTOR信号通路受到抑制;而免疫印迹分析表明RPL17、RPS4X和p-mTOR/mTOR都显著性下调(P<0.05),表明仔猪骨骼肌蛋白质的合成受到抑制。3.早期断奶应激促进仔猪骨骼肌自噬的发生,在处理组中,LC3-II/β-tubulin呈显著性上调(P<0.01),同时透射电镜检测发现自噬泡的数量显著增多(P<0.01),表明早期断奶应激上调仔猪骨骼肌自噬水平;而PRKAR1A、核内定位的p-CREB以及自噬起始的多个关键基因ATG5、ATG12和CAPNS1的显著性上调表达,表明早期断奶应激刺激仔猪骨骼肌中自噬水平的上调可能是通过PKA/CREB信号通路。试验二断奶仔猪分别饲喂含1.66%(NL组)和2.1%(HL组)亮氨酸的日粮,利用iTRAQ技术分别对NL组和HL组断奶仔猪骨骼肌样品进行差异显著蛋白质的筛选与定量,并进行后续的生物信息学分析和验证,得出如下结果:1.利用iTRAQ共计筛选到有157个受亮氨酸影响差异显著蛋白质,后续的生物信息分析表明亮氨酸改变断奶仔猪骨骼肌中的能量代谢,HL组断奶仔猪骨骼肌中SDHB、ATP5F1、ACADM和HADHB都显著性下调表达(P<0.01,除ATP5F1,P<0.05),而PKM显著性上调(P<0.05),同时ATP含量显著下降(P<0.05),表明亮氨酸抑制仔猪骨骼肌中的氧化磷酸化和脂肪酸的β-氧化,促进糖酵解。2.亮氨酸促进断奶仔猪骨骼肌中蛋白质的合成,促进p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K以及RPS4X的显著性上调表达(P<0.05)。3.亮氨酸改变仔猪骨骼肌肌纤维的组成,与NL组相比,HL组中慢收缩肌纤维特异性蛋白TNNI1显著下调(P<0.01),快收缩肌纤维特异性蛋白TNNI2显著上调(P<0.01),同时MyHC-I,MyHC-IIa和MyHC-IIx呈现的显著下调(P<0.05),MyHC-IIb的显著上调(P<0.05),表明亮氨酸促进断奶仔猪骨骼肌中慢收缩肌纤维向快收缩肌纤维的转化。