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目的：1.探索正常肝脏和肝癌细胞中的细胞自噬现象。2.研究肝脏在缺血再灌注损伤时细胞自噬水平变化规律。3.通过缺血预处理减轻再灌注损伤,观察预处理保护效应是否伴随细胞自噬水平的变化。4.研究预处理调控自噬进而影响再灌注损伤过程中所涉及的分子及信号通路。5.调控肝癌细胞中的自噬水平,探索自噬调控对肿瘤细胞化疗敏感性的影响。方法：1.构建C57BL6小鼠70%缺血再灌注模型,比较正常组、单纯缺血再灌注组、预处理组的ALT水平、细胞坏死情况和ATP水平。2.采用Western Blot检测自噬特异标记分子LC3蛋白,透射电镜观察自噬小体,比较三组不同时间点自噬水平的变化趋势。3.采用Western Blot检测P70S6K和4EBP1的表达情况,探索mTORC1复合物活性的变化。4.检测核转录因子TFEB蛋白的表达情况,探索预处理调控自噬的可能分子信号通路。5.利用软件预测自噬基因STMN1、 RAB5A、ATG4D和mTOR特异性靶miRNA,并选择肝癌细胞株HepG2转染特异性靶miRNA进行功能研究。6.构建包含特异性靶miRNA识别序列及其突变序列的3’-UTR质粒,用荧光素酶报告基因进行检测来验证特异性靶miRNA与靶基因的联系。7.采用Western Blot检测自噬特异标记分子LC3蛋白,透射电镜观察自噬小体,观察HepG2细胞转染特异性靶miRNA模拟物、抑制物后的自噬水平变化趋势。8.采用流式细胞仪检测转染特异性靶miRNA模拟物、抑制物后HepG2细胞对顺铂化疗的敏感性。结果：1.缺血预处理可以降低小鼠肝脏缺血再灌注损伤后血清ALT水平,同时减少缺血再灌注损伤导致的肝细胞坏死。2.Western Blot和透射电镜证实缺血预处理可以增强肝细胞自噬。3.在缺血再灌注后,预处理组自噬增强,小鼠肝脏组织中ATP含量升高。4.缺血预处理可以使小鼠肝脏组织中的nTORC1复合物的活性降低,TFEB核转位,自噬相关基因LC3表达上调,细胞自噬活动增强。5.miR-101可显著降低含有STMN1, RAB5A, ATG4D和mTOR基因的3’-UTR质粒的荧光素酶活性,对含有突变序列的3’-UTR质粒没有显著影响。6.miR-101能够直接靶向调节STMN1, RAB5A, ATG4D和mTOR,同时影响它们mRNA和蛋白水平。7.miR-101可以抑制hepG2细胞内自噬。8.在顺铂处理48小时后,转染miR-101-mimic组凋亡比例为25.37+4.05%,而转染miR-101-mimic-control组细胞凋亡比例只有14.28±1.73%；转染miR-101-inhibitor组凋亡比例为7.35+2.25%,而转染miR-101-inhibitor-control组细胞凋亡比例为15.31±2.31%；野生型HepG2细胞凋亡比例为15.19±2.37%。结论：1.正常肝脏以及肿瘤细胞中存在着基础状态的自噬。2.肝脏缺血再灌注后自噬水平上调。3.缺血预处理可以减轻肝脏缺血再灌注损伤。4.缺血预处理的保护机制可能是通过抑制mTORC1复合物的活性,促进TFEB核转位,激活自噬基因,从而预先上调细胞自噬水平,使细胞在随后的长时间再灌注损伤下存活。5.在肝癌细胞中,miR-101靶向调控自噬相关基因STMN1, RAB5A,ATG4D和mTOR,使上述自噬基因表达下调,从而抑制肝癌细胞的自噬。6.miR-101诱导的自噬抑制可以增强肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性。7.对于肝脏缺血再灌注损伤,预先上调细胞自噬水平,减轻随后的再灌注损伤可能是将来的再灌注损伤治疗的一个思路。8.对于肝脏肿瘤细胞,通过靶向抑制肿瘤细胞的自噬水平,使肿瘤细胞对化疗、放疗等敏感性增强,是未来肿瘤分子靶向治疗的可能途径之一。