乳杆菌是常见的益生菌，是重要的工业微生物资源，但针对乳杆菌属细菌，至今没有统一检测标准和鉴定方法。实验采用生理生化方法、16S rRNA基因序列分析方法和Biolog微生物自动分析系统方法对来源于世界权威保藏机构的5株干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)、5株类干酪乳杆菌类干酪亚种(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei)及5株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)，共15株进行复核鉴定，以探讨上述鉴定方法对这3种乳杆菌属细菌的鉴定效果。实验结果显示应用生理生化方法不易将15株供试乳杆菌菌株区分开，且操作繁琐，实验周期较长，生理生化实验结果可为菌株的鉴定提供数据参考；16SrRNA基因序列分析方法可将这15株乳杆菌的鉴定到属，并进一步鉴定到干酪乳杆菌群，由于供试乳杆菌菌株基因具有较高同源性，故无法准确鉴定到种；Biolog微生物自动分析系统对上述15株乳杆菌可以给出较好的鉴定结果，能够快速反应出各乳杆菌株对95种碳源的利用情况；构建Biolog系统发育树，能够准确分析菌株属的分类学地位，但该系统对这3种乳杆菌鉴定的普遍适用性仍需要大量实验数据的支持。实验采用的三种鉴定方法，在不同的水平上显示出各自特有的鉴定效果，通过多项鉴定方法建立针对这3种乳杆菌属细菌的多相鉴定体系具有可行性，并对乳杆菌属其它种的鉴定，提供了一定的技术路线和理论指导，也可为当前日益普及的乳杆菌制品的质量控制提供必要的手段。