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目的：观察节律式应用低剂量环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）调控Treg的基础上联合新生血管干预治疗对小鼠肝癌的抗瘤效果，并对其相关机制进行探讨。方法：1、C57BL/6J小鼠荷瘤模型建立后第7天，以25mg/kg到200mg/kg不同的剂量对小鼠行腹腔注射CTX，用流式细胞术检测小鼠脾脏组织中CD4~+CD25~+FOXP3~+/Treg的比值，筛选出CTX的最佳剂量；2、比较单次和节律式应用CTX对小鼠脾脏组织中Treg的影响：各组小鼠荷瘤后7d、11d、14d、18d、21d、25d、28d，每时间点每组各6只，颈椎脱臼法处死小鼠留取脾脏组织，检测其CD4~+CD25~+FOXP3~+/Treg比值，同时观测小鼠肿瘤的大小，绘制肿瘤生长曲线，应用ELISA法检测T-淋巴细胞干扰素-γ（IFN-γ）的分泌量来观察对自身免疫病的影响；3、新生血管干预治疗联合节律式低剂量应用CTX对小鼠肝癌的抗瘤效果：建立C57BL/6J小鼠皮下肿瘤模型，待肿瘤长至100-150mm2体积大小时备用，分为4组，第一组为对照组：7d、14d、21d腹腔注射PBS(100mg/kg)；第二组为单纯CTX组，7d、14d、21d腹腔注射CTX（100mg/kg）；第三组为单纯BV组，4d、7d、11d、14d、18d、21d腹腔注射BV(5mg/kg)；第四组为BV~+CTX联合治疗组，4d、7d、11d、14d、18d、21d腹腔注射BV(5mg/kg)，7d、14d、21d腹腔注射CTX（100mg/kg），治疗结束后制备脾脏淋巴细胞单细胞悬液以流式细胞仪检测CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg细胞量，分析新生血管干预联合节律式应用低剂量CTX对肿瘤微环境中CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg的影响。绘制肿瘤生长曲线和小鼠生存期。采用ELISA法检测各组小鼠血清IFN-γ水平。结果：1、随着荷瘤时间的延长，荷瘤鼠脾脏组织中CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg的比值逐渐升高，至荷瘤后14d明显高于对照组（P<0.05）。2、当CTX的剂量为100mg/kg时，荷瘤鼠脾脏组织中CD4~+CD25~+FOXP3~+/Treg比值明显降低（P<0.05）。3、单次应用CTX抑制Treg的时间较短，而节律式应用低剂量CTX能够延长对Treg的抑制作用（P <0.05），维持其在相对降低的水平（P<0.05）。4、节律式应用CTX显著提高了荷瘤鼠脾脏T淋巴细胞IFN-γ的分泌水平（P<0.05）。5、CTX组和对照组相比肿瘤生长无明显减缓，BV组和CTX~+BV组的肿瘤生长与对照组相比均显著减缓（P<0.05）。生存分析显示，BV组生存期有了显著改善，同BV组相比，BV+CTX组生存期亦有显著提高，表明BV和节律式CTX联合应用可以增强BV的抗瘤效果。BV+CTX联合治疗组有2只小鼠瘤体逐渐减小并消退，小鼠长期存活，且无肿瘤复发。6、应用BV单药治疗或者联合CTX治疗小鼠脾脏的Treg水平分别为7.172.18，5.071.47，均明显低于对照组、单药CTX组，其差异具有统计学意义（P<0.05）。联合治疗组高于单纯BV组，其差异具有统计学意义（P<0.05）。BV+CTX组小鼠的血清IFN-γ水平均明显高于其他各组，其差异均有统计学意义（P<0.05）7、应用CTX的各治疗组中均未出现免疫性白斑等自身免疫病及明显毒副作用。结论：1、随着肿瘤的生长进展，荷瘤小鼠脾脏组织中Treg比例逐渐升高。2、对于C57BL/6J荷瘤小鼠，CTX清除Treg的最佳剂量为100mg/kg。3、单次应用CTX抑制Treg的时间较短，而以最佳剂量，每周一次，节律式应用CTX能够使Treg在较长的时间段内维持在相对较低的水平，节律式应用CTX可能更具有使用价值。4、与单纯BV组、CTX组相比，BV+CTX治疗组取得了最佳的抑瘤效果，荷瘤小鼠的存活期明显延长，生存率明显提高，血清IFN-γ水平明显高于其他各组。提示节律式应用CTX，能显著提高新生血管干预治疗的疗效。5、节律式低剂量应用CTX可以有效抑制小鼠脾脏组织中Treg的浸润，逆转机体的免疫抑制微环境，在抑制Treg的基础之上联合新生血管干预BV治疗可以提高小鼠肝癌的治疗效果，为其临床应用提高了必要的理论依据。6、节律式应用低剂量CTX联合新生血管干预治疗未导致自身免疫病的发生，是安全可靠的。