目的：建立分离基因组DNA中差异甲基化片段的消减抑制杂交技术，初步探讨其在分离肝癌细胞系中不同DNMTs表达抑制后所影响甲基化序列的应用。 方法：根据基因组甲基化位点的序列特点，设计了消减抑制杂交方案，并且对实验条件和体系进行了优化。这样可以提高分离差异甲基化片段的特异性。抑制性消减杂交有效滤出杂余片段，多级磁珠的分离可以提高差异片段的检出率。应用消减抑制杂交方法在DNMTs表达抑制的肝癌细胞系中分离不同DNMTs可能的作用片段。初步尝试此方法在肝癌患者外周血基因组分离差异甲基化片段，并以NCBI BLAST数据库分析所获各组片段的序列特点及在基因组中分布规律。 结果：运用消减杂交、抑制性PCR、磁珠分离原理建立了分离差异甲基化片段的消减抑制杂交技术，可以应用在基因组范围内分离差异甲基化片段。在肝癌细胞系基因中可以筛选到不同DNMTs可能的作用片段，在肝癌病例外周血基因组DNA中可能分离出差异甲基化片段。所获片段在基因组中分布较广泛，集中存在于重复序列，基因的启动子区，符合甲基化位点分布规律。与已有的差异甲基化筛选方法相比，此方法具有实验步骤简单、实验材料易得、实验技术容易掌握、实验周期短等优点，是一种新型全基因组差异甲基化片段筛选的工具。 结论：消减抑制杂交方法能够用于筛选不同样品基因组。DNA 中差异甲基化片段，是一种分离差异甲基化片段的新方法。