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精油也称为芳香油,它是以香料植物的花、根、叶、茎等为原料,经蒸馏、萃取或压榨等工艺提取的具有香味的油性物质。有些精油的主要成分是具有丙烯基苯结构的化合物,这些物质通常作为化学法合成香料的起始原料。如果采用微生物或者酶法转化这类丙烯基苯结构化合物,就有可能得到高附加值的天然生物香料。丁香酚和异丁香酚是丁香叶油的主要成分,具有典型的丙烯基苯结构,是合成香兰素的初始物。因此本课题选择这两种化合物作为丙烯基苯化合物的模式物,筛选能转化此类物质的微生物,以获得有价值的芳香化合物;同时对影响转化的因素、相关代谢途径、代谢规律及产物分离纯化条件进行了探讨。 本工作通过从果园土样中筛选耐受高浓度丁香酚和异丁香酚的微生物、检验菌株代谢底物能力,获得了一株能够在10gl-1异丁香酚浓度下生长的菌株HS8,确定其可以代谢异丁香酚并产生香兰素。菌株HS8为典型的杆状菌,无分枝,多呈二联体;革兰氏染色为阳性;有椭圆形芽孢,芽孢位于菌体的中部;菌株严格好氧;过氧化氢酶实验、明胶淀粉水解实验、硝酸盐还原实验、V-P实验和柠檬酸盐的利用实验均呈阳性反应;能利用D-葡萄糖、D-甘露醇、D-木糖和L-阿拉伯糖产酸。HS8的16S rDNA序列(GenBank accession No.DQ309333)与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的16S rDNA序列相似性超过99%。根据上述结果,HS8被鉴定为枯草芽孢杆菌,并命名为B.subtilis HS8。 初步研究了B.subtilis HS8转化异丁香酚的基本特性。异丁香酚对细胞有毒性,B.subtilis HS8具有较强的耐受异丁香酚毒性的能力。在0.5%异丁香酚存在时,HS8繁殖能力能够达到正常条件下的85%。当异丁香酚浓度超过1.0%时,HS8生长受到明显抑制。在2%异丁香酚存在时,不能观察到菌体的生长,显微镜下观察到菌体发生自溶。HS8能够转化1gl-1异丁香酚生成0.21gl-1香兰素。由于B.subtilis HS8具有的耐受较高浓度异丁香酚、转化异丁香酚生成香兰素的特征,该菌株被选择作为本课题研究的主要菌株。 以提高香兰素产量为目标,对HS8转化异丁香酚的条件进行了优化。培养基的碳氮源选择表明,葡萄糖和蔗糖是菌体生长的最佳碳源,豆饼粉不仅有利于