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苹果在我国农业产业结构调整和农民增收中占有十分重要地位,砧木的选择在提高苹果产量和质量方面起着重要的作用。无融合生殖特性是保证苗木生长整齐的重要农艺性状,选育抗性强、根系发达的无融合生殖实生砧木是重要的育种目标。目前,人们对无融合生殖的分子机理还不清楚,限制了无融合生殖特性在砧木改良中的应用。本文运用表达谱分析技术,对平邑甜茶无融合生殖相关基因进行高通量分析,并选择MhAN1-like进行分子克隆和功能鉴定。主要结果如下: 1.平邑甜茶杂交群体表达谱分析:结果表明,与低单性生殖率群体相比在高单性生殖率群体中,表达上调和下调的基因分别为609和723个。而在与低无融合非减分裂群体相比在高无融合非减分裂群体中,133个基因表达上调,357个基因表达下调。差异基因富含亮氨酸、蛋白激酶、锌指结构等多种结构域。涉及抗性机制、信号转导、染色质水平调节等多种功能。差异基因主要在细胞内富集;参与次级代谢途径、氨基酸代谢途径、能量代谢途径等各种生理生化过程。 2.MhAN1-like生物信息学分析和原核表达:基因MhAN1-like的ORF为582bp,推测编码193个氨基酸,蛋白含有两个AN1结构域;37℃条件下成功对MhAN1-like蛋白进行了原核表达。 3.亚细胞定位:采用GFP融合蛋白技术进行了亚细胞定位分析,结果表明MhAN1-like蛋白定位于细胞核中。 4.功能鉴定:获得了该基因的转基因番茄株系,干旱处理表型分析表明,在番茄中异位表达MhAN1-like基因的明显降低转基因番茄的抗旱能力。